典型文献
过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定
文献摘要：
目的 构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)的HEK293细胞株,为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型.方法 通过PCR扩增,连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1,转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株.后续研究分为3组进行:①TrxR1过表达HEK293细胞:pLVX-Puro-TXNRD1载体稳定转染细胞;②对照HEK293细胞:pLVX-Puro空载病毒载体稳定转染细胞;③正常HEK293细胞;通过RT-qPCR、Western blot实验检测上述3组细胞中TrxR1的mRNA以及蛋白表达情况;通过胰岛素终点法以及TRFS-green探针成像检测上述3种细胞内TrxR1的酶活力;通过CCK8实验检测上述3种细胞对TrxR1特异性抑制剂auranofin的敏感性.结果 构建载体经DNA测序,成功获得插入TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1.与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1的mRNA和蛋白高表达,且酶活力也同样显著上升(P<0.005);而与HEK293以及HEK293-NC细胞相比,auranofin对HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1酶活力以及细胞增殖的抑制效率均显著下降(P<0.005).结论 通过构建pLVX-Puro-TXNRD1慢病毒载体,成功获得过表达TrxR1酶的HEK293细胞株,该细胞对特异性靶向TrxR1的抑制剂的抗增殖作用具有抵抗,因而可用于靶向TrxR1药物的筛选.
文献关键词：
硫氧还蛋白还原酶1;慢病毒包装;过表达;细胞模型
中图分类号：
作者姓名：
吕晓梅;周知音;朱丽;周吉;黄慧丹;张超;刘晓平
作者机构：
皖南医学院药物筛选与评价研究所;附属弋矶山医院生殖医学中心,安徽 芜湖 241000
文献出处：
引用格式：
[1]吕晓梅;周知音;朱丽;周吉;黄慧丹;张超;刘晓平-.过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定)[J].南方医科大学学报,2022(04):554-560
A类：
TRFS,auranofin
B类：
过表达,TrxR1,HEK293,细胞株,硫氧还蛋白还原酶,功能研究,药物筛选,细胞模型,接转,Sanger,脱氧,重组慢病毒,慢病毒表达载体,pLVX,Puro,TXNRD1,嘌呤霉素,稳定转染,空载,qPCR,blot,实验检测,green,成像检测,酶活力,CCK8,NC,OE,抑制效率,慢病毒载体,抗增殖,增殖作用,慢病毒包装
AB值：
0.19764
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