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猪miR-22前体上游序列突变的PK15细胞系构建
文献摘要：
猪miR-22前体上游序列片段突变可能对miR-22的表达起到重要调控作用,为进一步探究其功能,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过针对猪miR-22前体上游序列片段设计2个靶标sgRNAs(short guide RNAs),构建重组表达载体pX459-sgRNA1和pX459-sgRNA2;随后将重组质粒转染猪肾上皮细胞系(PK15),经嘌呤霉素初步筛选后,提取基因组DNA,通过PCR及测序鉴定编辑效果;最后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测编辑前后miR-22相对表达量的变化.结果显示,81个阳性克隆中,共产生6种突变类型,突变率达60.49％;qRT-PCR检测显示,编辑后miR-22的表达量显著下调约50％.本研究成功获得了miR-22前体上游序列突变的猪PK15细胞模型,为今后猪miR-22的功能研究提供了新的可应用研究对象.
文献关键词：
猪;微小RNA;突变;CRISPR/Cas9技术;PK15细胞系
中图分类号：
作者姓名：
丁兆雪;王佳洁;沈中浩;周晓龙;杨松柏;金航峰;赵阿勇;汪涵
作者机构：
浙江农林大学 动物科技学院·动物医学院,浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室,浙江 杭州311300
文献出处：
引用格式：
[1]丁兆雪;王佳洁;沈中浩;周晓龙;杨松柏;金航峰;赵阿勇;汪涵-.猪miR-22前体上游序列突变的PK15细胞系构建)[J].浙江农业学报,2022(09):1849-1855
A类：
pX459,sgRNA1,sgRNA2
B类：
miR,PK15,细胞系,CRISPR,Cas9,基因编辑技术,靶标,sgRNAs,short,guide,重组表达,表达载体,重组质粒,质粒转染,上皮细胞,嘌呤霉素,初步筛选,定编,qRT,相对表达量,隆中,突变率,细胞模型,功能研究
AB值：
0.298473
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