[目的]BCL2L11在哺乳动物中能够促进多种细胞凋亡,同时参与繁殖性状相关组织器官的发育及疾病治疗,文章利用分子生物学方法探究miR-221-3p靶向调控BCL2L11对小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡的影响,为进一步研究BCL2L11在卵泡颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁过程中的调控作用提供依据.[方法]在前期课题组卵巢组织全转录组测序分析的基础上,获得了候选基因BCL2L11及其调控元件miR-221-3p,利用半定量和组织荧光定量(RT-qPCR)分析BCL2L11在小尾寒羊不同组织中的表达情况;通过RT-qPCR定量试验在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中鉴定了 BCL2L11及miRNA-221-3p的表达情况;构建BCL2L113'UTR野生型和突变型载体,在HEK293T细胞中共转染miR-221-3p mimic和BCL2L11野生型和突变型及阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统确定miR-221-3p与BCL2L11靶向性关系;在绵羊卵巢原代颗粒细胞中转染miR-221-3p mimic及阴性对照实现miR-221-3p过表达,使用RT-qPCR技术在mRNA水平上检测miR-221-3p对BCL2L11以及卵巢颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas表达水平的影响;同时利用EdU试验分析miR-221-3p过表达和阴性对照组中颗粒细胞的增殖变化.[结果]半定量和组织RT-qPCR分析均表明BCL2L11在卵巢组织中表达量高于其他组织;RT-qPCR定量结果显示miR-221-3p和 BCL2L11在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中差异表达,miR-221-3p在卵泡期卵巢中的表达量高于黄体期,而BCL2L11在卵泡期卵巢中的表达量低于黄体期,表现出负调控的现象;双荧光素酶报告基因验证分析显示,过表达miR-221-3p mimic显著抑制了 BCL2L11 3'UTR荧光素酶的活性(P＜0.05),阴性对照组则没有显著影响;过表达miR-221-3p,靶基因BCL2L11 mRNA表达水平显著降低,同时,卵泡颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas的表达量也显著降低(P＜0.05);EdU试验分析显示,过表达miR-221-3p的颗粒细胞增殖率为18.9％,极显著高于阴性对照组的10.43％(P＜0.01).[结论]BCL2L11和miR-221-3p是调控绵羊卵巢发育的重要基因及调控元件,BCL2L11是miR-221-3p的靶基因之一,miR-221-3p过表达可抑制颗粒细胞凋亡,该作用结果可能通过抑制靶基因BCL2L11的表达进而影响了绵羊卵巢颗粒细胞的凋亡.

miR-221-3p;小尾寒羊;卵巢颗粒细胞凋亡;BCL2L11

刘玉芳;陈玉林;周祖阳;储明星

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室,北京100193;河北工程大学生命科学与食品工程学院,河北邯郸056001

中国农业科学

[1]刘玉芳;陈玉林;周祖阳;储明星-.miR-221-3p靶向BCL211调控小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡)[J].中国农业科学,2022(09):1868-1876

BCL211,BCL2L11,BCL2L113

3p,小尾寒羊,卵泡颗粒细胞,哺乳动物,繁殖性状,组织器官,疾病治疗,分子生物学方法,方法探究,靶向调控,卵泡闭锁,卵巢组织,全转录组测序,转录组测序分析,候选基因,半定量,qPCR,不同组织,卵泡期,黄体期,miRNA,UTR,野生型,突变型,HEK293T,共转染,mimic,双荧光素酶报告基因,基因检测,靶向性,绵羊,原代,照实,过表达,卵巢颗粒细胞凋亡,标志基因,XIAP,Fas,EdU,试验分析,细胞的增殖,组织中表达,他组织,差异表达,巢中,负调控,验证分析,靶基因,颗粒细胞增殖,细胞增殖率,卵巢发育,可抑制

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