典型文献
基于CRISPR/Cas9系统的多基因敲除载体的构建及其敲除效率检测
文献摘要：
CRISPR/Cas9系统是近年来快速发展的一种简单高效的基因编辑系统.在哺乳动物中,同时靶向敲除多基因的研究仍然较为匮乏.为优化哺乳动物中靶向多基因的敲除系统的构建,本研究在已有的CRISPR/Cas9载体的基础上进行升级改造,将4个U6启动子介导的小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达框串联至一个载体中的形式制备了多基因位点编辑载体,分别选取家猪(Sus scrofa)的去乙酰化酶3基因(sirtuin 3,Sirt3)和围脂滴蛋白1基因(perilipin 1,Plin1)的2个sgRNA,构建了2个猪Sirt3 sgRNA的基因编辑载体(S2)、2个猪Plin1 sgRNA基因编辑载体(P2)和同时包括上述4个sgRNA的基因编辑载体(S2P2),上述载体分别转染猪肾细胞PK15,以转染未装载靶点质粒的细胞为对照组(CON组),在各实验组细胞目的基因的DNA水平、RNA水平和蛋白水平检测目的基因敲除效率.结果表明,各实验组细胞目的基因DNA中均检测出突变,S2P2组和S2组中Sirt3基因突变率分别为33％和26％,S2P2组和P2组中Plin1基因突变率分别为33％和24％;对目的基因RNA水平与蛋白水平的检测结果表明,与CON组相比,所有实验组的目标基因mRNA及蛋白表达量均有所下降,差异极显著(P<0.01),其中S2组与S2P2组间Sirt3基因表达量差异不显著;P2组与S2P2组间Plin1基因表达量差异不显著.本研究通过改良的CRISPR/Cas9载体系统构建了可以同时对猪Sirt3基因和Plin1基因高效编辑的载体,有助于后续开展多基因功能的研究.
文献关键词：
CRIPSR/Cas9;多基因敲除;载体构建
中图分类号：
作者姓名：
徐磊;赵育蓉;胡悦旻;王昊;彭玥晗;鞠辉明
作者机构：
扬州大学兽医学院,扬州225009;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009;扬州大学广陵学院,扬州225009
文献出处：
引用格式：
[1]徐磊;赵育蓉;胡悦旻;王昊;彭玥晗;鞠辉明-.基于CRISPR/Cas9系统的多基因敲除载体的构建及其敲除效率检测)[J].农业生物技术学报,2022(05):1023-1030
A类：
多基因敲除,S2P2,CRIPSR
B类：
CRISPR,Cas9,敲除载体,除效率,效率检测,基因编辑,哺乳动物,靶向敲除,中靶,升级改造,U6,启动子,向导,small,guide,sgRNA,基因位点,家猪,Sus,scrofa,去乙酰化酶,sirtuin,Sirt3,围脂滴蛋白,perilipin,Plin1,转染,猪肾细胞,PK15,装载,质粒,CON,目的基因,水平检测,检测目的,基因突变,突变率,基因表达量,载体系,系统构建,基因功能,载体构建
AB值：
0.296622
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