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山羊β防御素124定位及过表达附睾头上皮细胞系的建立
文献摘要：
为研究山羊β防御素124(BD124)的生物学功能,进行附睾头上皮细胞BD124的定位研究,并建立BD124过表达附睾头上皮细胞系,应用细胞免疫荧光法对山羊附睾头上皮细胞BD124进行定位;将山羊BD124基因编码区序列连接到LV5穿梭质粒后,测序验证LV5-BD124质粒构建情况,然后将其与包装质粒共转染293T细胞进行包装生产并重组LV5-BD124慢病毒,并采用有限稀释法测定病毒滴度;之后采用实时荧光定量PCR和Western blot检测确认LV5-BD124慢病毒侵染96、120 h后山羊附睾头上皮细胞中BD124 mRNA和蛋白的过表达情况;最后用嘌呤霉素进行2次筛选后获得BD124过表达稳转附睾头上皮细胞系.定位结果显示,BD124阳性绿色荧光信号在细胞核周围高度聚集,且在细胞质和细胞核内也有分布.测序结果显示,BD124序列插入LV5慢病毒载体后,表达的LV5-BD124慢病毒载体滴度为3.0×108 TU/mL.荧光定量PCR和Western blot结果显示,LV5-BD124附睾头上皮BD124 mRNA和蛋白表达量显著高于对照组;LV5-BD124侵染后的附睾头上皮细胞经2次嘌呤霉素筛选后,阳性细胞比例增加,传2代后细胞内荧光信号保持稳定.
文献关键词：
山羊;附睾头上皮细胞;β防御素124;稳转系
中图分类号：
作者姓名：
黄鑫芸;张俊梅;邰苗苗;孟繁荣;任有蛇;张春香
作者机构：
山西农业大学 动物科学学院,山西 太谷 030801;河南省农垦发展服务中心,河南 郑州450003
文献出处：
引用格式：
[1]黄鑫芸;张俊梅;邰苗苗;孟繁荣;任有蛇;张春香-.山羊β防御素124定位及过表达附睾头上皮细胞系的建立)[J].山西农业科学,2022(10):1476-1481
A类：
附睾头上皮细胞,BD124,LV5,稳转系
B类：
山羊,防御素,过表达,细胞系,生物学功能,定位研究,细胞免疫,免疫荧光法,基因编码,编码区,接到,穿梭,质粒构建,共转染,293T,行包,有限稀释,稀释法,病毒滴度,blot,病毒侵染,后山,嘌呤霉素,定位结果,荧光信号,细胞核,细胞质,慢病毒载体,TU,阳性细胞
AB值：
0.150539
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