为克隆桑天牛纤维素酶编码基因并将其在哺乳动物细胞中进行分泌表达,提取桑天牛肠道组织RN A进行RT-PCR扩增纤维素酶基因,构建真核表达载体并转染PK15细胞,测定细胞培养液的酶活性,用RT-PCR检测纤维素酶基因的表达情况.结果表明,通过RT-PCR成功扩增出纤维素酶基因AgcⅠ(711 bp)、AgcⅡ(720 bp),与目的基因相比,核苷酸序列相似性分别为99.4％、98.3％,氨基酸序列的相似性分别为100.0％、99.6％;构建出纤维素酶基因真核表达载体pCMS-AgcⅠ、pCMS-AgcⅡ,转染PK15细胞后,当pH值为4.5时测得细胞培养液的纤维素酶活性分别为0.07、0.20 U/mL,当pH值为5.5时测得细胞培养液的纤维素酶活性分别为0.09、0.24 U/mL;在细胞培养液中还测到了β-葡聚糖酶活性,pH值为4.5时的酶活性分别为0.05、0.16 U/mL,pH值为5.5时的酶活性分别为0.27、0.43 U/mL;AgcⅡ基因表达的纤维素酶活性及β-葡聚糖酶活性都显著高于AgcⅠ基因;通过PK15细胞的RT-PCR试验也检测到了AgcⅠ、AgcⅡ基因的表达.研究成功克隆出纤维素酶基因AgcⅠ、AgcⅡ,并将其转入到PK15细胞中实现了分泌表达,可为桑天牛纤维素酶基因的应用提供参考.

桑天牛;纤维素酶基因;克隆;分泌表达;β-葡聚糖酶

张茂;潘宇杰;梁笑玲;张楚玥;陈少珍;林晓玲;李虹仪

韶关学院英东生物与农业学院,广东韶关512005

江苏农业科学

[1]张茂;潘宇杰;梁笑玲;张楚玥;陈少珍;林晓玲;李虹仪-.桑天牛纤维素酶编码基因的克隆及分泌表达)[J].江苏农业科学,2022(16):60-64

Agc,pCMS

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