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腐食酪螨Tyr p 34基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定
文献摘要：
目的 克隆腐食酪螨Tyr p 34基因,表达、纯化出重组蛋白,并鉴定其免疫原性.方法 提取腐食酪螨的总RNA,通过反转录聚合酶链式反应获得其cDNA片段.根据引物和cDNA进行PCR扩增,通过酶切连接构建表达载体pET-28a(+)-Tyr p 34,并将鉴定为阳性的重组表达质粒转入感受态大肠杆菌中.分别在高温及低温条件下,少量诱导表达重组蛋白Tyr p 34以进行蛋白鉴定;大量诱导表达该重组蛋白并采用亲和层析法纯化,将纯化后的目的蛋白用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测并进行免疫印迹分析(Western blot)及生物信息学分析.结果 双酶切结果显示Tyr p 34基因与载体成功连接.少量表达后进行蛋白鉴定,显示目的基因在大肠杆菌中成功表达,Tyr p 34蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在,在高温组中含量相对较多.大量表达后纯化的重组Tyr p 34蛋白分子量约为20 kDa.Western blot显示有明显条带,表明该重组基因所表达的蛋白可与腐食酪螨过敏患者的血清反应.生物信息学分析结果显示Tyr p 34基因大小为462 bp,编码153个氨基酸.氨基酸序列与NCBI公布的Tyr p 34氨基酸序列(登录号:ACL36923.1)同源性为99％.Tyr p 34蛋白有5个磷酸化位点,主要由无规则卷曲和α-螺旋构成.结论 腐食酪螨Tyr p 34基因成功克隆并表达、纯化出重组蛋白,该蛋白具有免疫原性.通过Tyr p 34的生物信息学分析,有利于深入研究腐食酪螨过敏原的结构和理化性质.
文献关键词：
腐食酪螨;Tyr p 34;蛋白鉴定;免疫原性;生物信息学分析
中图分类号：
作者姓名：
王昱嘉;陈德盛;袁如意;钟永浩;刘晓宇
作者机构：
深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东深圳 518060
文献出处：
引用格式：
[1]王昱嘉;陈德盛;袁如意;钟永浩;刘晓宇-.腐食酪螨Tyr p 34基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定)[J].中国医药科学,2022(13):22-26
A类：
ACL36923
B类：
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AB值：
0.274198
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