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表达促凋亡蛋白Bid的重组耻垢分枝杆菌的构建及其对巨噬细胞凋亡的影响
文献摘要：
目的 构建表达并分泌外源性促凋亡蛋白Bid的重组耻垢分枝杆菌,并研究其对小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响.方法 运用生物信息技术对小鼠Bid蛋白质的理化性质、分泌属性、保守结构域及蛋白相互作用网络等进行分析,应用无缝克隆技术及传统酶切酶连方式构建pMV261-ASP(BamHI)-10His、pMV261-ASP(BamHI)-Bid-10His、pMV261-ASP(EcoRI)-10His、pMV261-ASP(EcoRI)-Bid-10His重组质粒,并电转化入耻垢分枝杆菌;通过BCA蛋白定量及免疫印迹技术分析蛋白表达情况,采用AnnexinV-FITC/PI双染法流式检测Bid重组耻垢分枝杆菌对RAW264.7小鼠巨噬细胞凋亡的影响.结果 小鼠Bid蛋白是一种等电点为4.80的亲水性蛋白质,其中亮氨酸所占比例最高,为11.3％,色氨酸含量最低,为0.5％;二级结构中,α-螺旋(Hh)、无规则卷曲(Cc)、β-折叠(Ee)、β-转角(Tt)所占比例依次为65.13％、27.69％、4.10％、3.08％;Bid蛋白不具有跨膜结构域及信号肽,属于非分泌性蛋白质,具有死亡保守结构域,可与Caspase8、Bcl-2、Granzyme B等凋亡相关蛋白发生相互作用;本次构建的ASP-Bid重组耻垢分枝杆菌可以表达并分泌目标蛋白,且可增强RAW264.7小鼠巨噬细胞凋亡的比例.结论 表达外源基因Bid的重组耻垢分枝杆菌可以促进巨噬细胞凋亡发生,这可为新型结核病预防疫苗的研发提供新的思路与技术.
文献关键词：
结核病;耻垢分枝杆菌;信号肽;Bid;细胞凋亡
中图分类号：
作者姓名：
逄亚宁;杨国平;孟余;吴利先;李光华
作者机构：
大理大学基础医学院医学微生物与免疫学教研室,云南 大理 671000
文献出处：
引用格式：
[1]逄亚宁;杨国平;孟余;吴利先;李光华-.表达促凋亡蛋白Bid的重组耻垢分枝杆菌的构建及其对巨噬细胞凋亡的影响)[J].医学信息,2022(23):41-49
A类：
10His
B类：
促凋亡蛋白,Bid,耻垢分枝杆菌,巨噬细胞凋亡,建表,外源性,小鼠巨噬细胞,RAW264,生物信息技术,保守结构域,蛋白相互作用网络,无缝克隆技术,连方,pMV261,ASP,BamHI,EcoRI,重组质粒,电转化,化入,BCA,免疫印迹,印迹技术,AnnexinV,FITC,等电点,亲水性,亮氨酸,色氨酸,酸含量,二级结构,Hh,无规则,卷曲,Cc,折叠,Ee,Tt,跨膜结构域,信号肽,非分,分泌性蛋白,Caspase8,Bcl,Granzyme,凋亡相关蛋白,白发,外源基因,结核病,预防疫苗
AB值：
0.304585
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