目的:探讨烟曲霉对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）自噬流的影响。方法:灭活烟曲霉体外诱导小鼠BMDM不同时间（0、0.5、4、12 h），提取细胞蛋白，Western印迹法检测自噬关键蛋白LC3-Ⅰ型/Ⅱ型的转换及磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）Ser2481的蛋白水平。用烟曲霉和溶酶体阻断剂[包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64d+胃蛋白酶抑制剂pepstatin、巴佛洛霉素-A1（BAF-A1）、氯化铵、氯喹]单独或联合体外诱导小鼠BMDM不同时间（4、12 h）后，Western印迹法检测烟曲霉对新生的LC3-Ⅱ、细胞基础自噬流的影响，并通过共聚焦荧光显微镜观察烟曲霉与LC3、Rubicon（RUN domain Beclin-1-interacting and cysteine-rich-domain-containing protein）的共定位关系。不同处理时间数据结果采用非匹配 t检验分析，烟曲霉孢子和自噬溶酶体阻断剂两因素处理数据结果采用2 × 2析因分析方法。 结果:Western印迹显示，与对照组（0 h组）比较，烟曲霉体外诱导小鼠BMDM 0.5、4、12 h后细胞内LC3-Ⅱ表达逐渐增加，差异均有统计学意义（ t值分别为6.58、3.28、3.02，均 P < 0.05），但各组p-mTOR蛋白水平差异无统计学意义（ t值分别为0.441、0.477、0.382， P值分别为0.682、0.660、0.722）。与单独氯喹处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合氯喹处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异均有统计学意义（ t = 2.13、2.78，均 P < 0.05）。与单独氯化铵处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合氯化铵处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异均有统计学意义（ t = 2.92、2.92，均 P < 0.05）。与单独BAF-A1处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合BAF-A1处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异有统计学意义（ t = 2.13、2.13，均 P < 0.05）。与单独E-64d + pepstatin处理BMDM 4 h和12 h相比，烟曲霉联合E-64d + pepstatin处理后LC3-Ⅱ进一步增高，差异有统计学意义（ t = 2.13、2.92，均 P < 0.05）。用钙荧光白荧光标记的烟曲霉孢子刺激BMDM 8 h后，共聚焦荧光显微镜显示LC3、Rubicon主要包绕于烟曲霉周围，与烟曲霉均有共定位关系。 结论:烟曲霉体外诱导可增加小鼠BMDM基础自噬流。

烟曲霉菌;巨噬细胞;自噬;微管相关蛋白质类;微管相关蛋白1轻链3;LC3相关吞噬

杨璐;段志敏;徐松;陈旭;李岷

中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病研究所真菌科　江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室，南京　210042;南京医科大学全球健康中心，南京　210029

中华皮肤科杂志

[1]杨璐;段志敏;徐松;陈旭;李岷-.烟曲霉对小鼠巨噬细胞自噬流的影响初步研究)[J].中华皮肤科杂志,2022(11):962-968

Ser2481,64d+,pepstatin,微管相关蛋白质类

小鼠巨噬细胞,细胞自噬,自噬流,小鼠骨髓来源巨噬细胞,BMDM,灭活,体外诱导,关键蛋白,LC3,磷酸化,雷帕霉素靶蛋白,mTOR,阻断剂,半胱氨酸蛋白酶抑制剂,胃蛋白酶,A1,BAF,氯化铵,氯喹,联合体,共聚,荧光显微镜观察,Rubicon,RUN,domain,Beclin,interacting,cysteine,rich,containing,protein,共定位,不同处理,处理时间,数据结果,非匹配,检验分析,孢子,自噬溶酶体,素处理,荧光标记,烟曲霉菌,轻链,吞噬

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