目的:利用脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7，研究中介素对腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）诱导的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法:细胞分组为：对照组，脂多糖组，中介素处理组，磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）阻滞剂LY294002组。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞NLRP3炎症小体的激活情况及炎症因子IL-1β和IL-18表达，碘化丙锭（PI）染色法检测细胞焦亡的改变。计量资料以 ± s表示，组间差异比较采用方差分析，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与对照组[（0.83±0.09），（0.49±0.04）]比较，脂多糖组磷酸化（p）-PI3K/PI3K（0.44±0.05），p-Akt/Akt（0.27±0.06）比值均显著降低，与脂多糖组相比，脂多糖+中介素组细胞中p-PI3K/PI3K（1.22±0.18），pAkt/Akt（0.83±0.09）比值均显著升高（ F=31.40， P<0.001； F=50.88， P<0.001）。与对照组比较，脂多糖组（脂多糖和ATP）可刺激RAW264.7细胞炎症因子IL-1β、IL-18和NLRP3炎症小体（NLRP3，caspase-1，ASC）的mRNA及蛋白表达上调；与脂多糖组相比，中介素处理可抑制炎症因子IL-1β、IL-18和NLRP3炎症小体表达，这种效应可被PI3K/Akt通路的阻滞剂LY294002所阻断。Real-time PCR结果显示，IL-1β mRNA相对表达量：对照组为（1.00±0.11），脂多糖组为（8.32±0.61），脂多糖+中介素组为（8.32±0.55），脂多糖+中介素+LY组为（7.23±0.41）（ F=15.42， P<0.001）；IL-18 mRNA相对表达量：对照组为（1.00±0.17），脂多糖组为（1.82±0.21），脂多糖+中介素组为（1.14±0.15），脂多糖+中介素+LY组为（1.53±0.11）（ F=18.16， P<0.001）；NLRP3 mRNA相对表达量：对照组为（1.00±0.13），脂多糖组为（2.58±0.18），脂多糖+中介素组为（1.07±0.17），脂多糖+中介素+LY组为（1.33±0.32）（ F=15.98， P<0.001）；caspase-1 mRNA相对表达量：对照组为（1.00±0.09），脂多糖组为（6.20±0.19），脂多糖+中介素组为（3.43±0.06），脂多糖+中介素+LY组为（5.50±0.45）（ F=18.39， P<0.001）；ASC mRNA相对表达量：对照组为（1.00±0.21），脂多糖组为（4.58±0.48），脂多糖+中介素组为（2.07±0.51），脂多糖+中介素+LY组为（3.33±0.32）（ F=15.19， P<0.001）。蛋白质免疫印迹结果显示，IL-1β蛋白相对表达量：对照组为（100%），脂多糖组为[（188±14）%]，脂多糖+中介素组为[（112±11）%]，脂多糖+中介素+LY组为[（171±27）%]（ F=21.25， P<0.001）；IL-18蛋白相对表达量：对照组为（100%），脂多糖组为[（183±16）%]，脂多糖+中介素组为[（115±19）%]，脂多糖+中介素+LY组为[（179±23）%]（ F=19.62， P<0.001）；NLRP3蛋白相对表达量：对照组为（100%），脂多糖组为[（149±15）%]，脂多糖+中介素组为[（106±10）%]，脂多糖+中介素+LY组为[（144±15）%]（ F=14.35， P<0.001）；ASC蛋白相对表达量：对照组为（100%），脂多糖组为[（188±12）%）]，脂多糖+中介素组为[（110±18）%]，脂多糖+中介素+LY组为（192±8）%（ F=15.79， P<0.001）。 结论:中介素通过调节PI3K/Akt活性，抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦亡。

巨噬细胞;脂多糖类;细胞焦亡;NLRP3炎症小体;中介素;PI3K/Akt信号通路

山西医科大学第二医院检验科，太原　030001;山西中医药大学基础医学院，晋中　030619;山西医科大学微生物学与免疫学教研室，太原　030001

[1]景刚;张军锋;朱爱萍;杨佳;常思佳;黄太平;王艳红-.中介素对脂多糖诱导巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化及细胞焦亡的影响)[J].中华风湿病学杂志,2022(12):813-819,C12-1

+LY

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