目的:鉴定富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein-15，LRRC15)来源的优势细胞毒性T淋巴细胞(cytosolic T lymphocyte，CTL)表位肽，并验证其诱导CTL特异性抗乳腺癌免疫效应。方法:收集中国医科大学附属第一医院乳腺癌外科自2010年1月至2010年7月经手术病理证实的乳腺癌组织及正常组织各30例。利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas，TCGA)数据库和免疫组化方法评估LRRC15在乳腺癌中表达情况。利用免疫表位数据库(Immune Epitope Database and Analysis Resource，IEDB)联合SYFPEITHI数据库预测LRRC15蛋白序列中HLA-A2.1限定性CTL表位肽。利用分子对接软件MOE、T2亲和力实验和荧光共聚焦技术确认候选CTL表位肽与HLA-A2.1分子亲和性。利用酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT)以及流式细胞术检测CTL表位肽免疫活性。利用钙黄素和Dil标记乳腺癌细胞评价CTL表位肽诱导的杀伤效应。建立乳腺癌移植瘤模型进行免疫回输，在体内评估CTL表位肽诱导的抗肿瘤效应。结果:相比于正常组织，LRRC15 mRNA在乳腺癌组织中表达水平明显增高，组间差异有统计学意义[(4.00±1.57)比(1.31±0.72)， Z＝14.85， P <0.05]；LRRC15 mRNA表达与CD8 ＋T细胞浸润呈显著正相关性( r＝0.20， P<0.001)。LRRC15蛋白在乳腺癌组织中呈现高表达，可作为乳腺癌潜在靶点。在筛选得到的3条候选CTL表位肽中，L2与HLA-A2.1分子具有最高亲和力(FI＝2.490)。与阴性肽组相比，L2能够明显提升CD8 ＋T细胞亚群比例(27.70%比45.50%)，L2负载的树突状细胞(dendritic cells，DCs)能够明显提升CD8 ＋T细胞分泌干扰素(interferon，IFN) -γ的水平(50.20%比74.90%)。在最高效靶比时，L2诱导的效应细胞对乳腺癌细胞系MDA-MB-231的杀伤效应明显高于阴性肽对照组，组间差异有统计学意义[(19.30±2.20)%比(8.60±1.40)%， t ＝1.45， P <0.05]，但对乳腺上皮细胞MCF-10A无杀伤效应( P >0.05)。L2负载DCs诱导的CTL细胞对2例乳腺癌组织来源的原代肿瘤细胞表现出明显的杀伤效应，且杀伤效应随着效靶比增高而增加。与阴性肽相比，L2诱导的CTL效应细胞使小鼠移植瘤体积明显降低[(450±110)mm 3比(725±130 )mm 3， t ＝0.36， P <0.05]，生存时间明显延长[(35±4.5)d比(29.16±1.94)d，LogRank P ＝ 0.000 ]。 结论:LRRC15来源HLA-A2.1限定性CTL表位肽L2能够在体外有效的诱导CTL免疫应答反应，并发挥抗乳腺癌效应。

乳腺癌;毒性T淋巴细胞表位肽;富含亮氨酸重复蛋白15;肿瘤免疫治疗

汤海潮;刘雯思;于兆进

中国医科大学药学院药理学教研室，沈阳　110122

国际免疫学杂志

[1]汤海潮;刘雯思;于兆进-.LRRC15来源HLA-A2.1限制性CTL表位肽鉴定及其抗乳腺癌效应评价)[J].国际免疫学杂志,2022(05):441-448

LRRC15

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