目的 建立一种基因工程重组登革病毒(DENV)E蛋白抗原联合检测人血清中DENVIgG、IgM的间接ELISA方法.方法 将前期已获得的含密码子优化的DENV E蛋白抗原编码序列的原核表达质粒pET-28a(+)-E-1-G5转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,利用亲和层析获得纯化的重组E-1-G5蛋白;棋盘滴定法确定重组E-1-G5间接ELISA检测DENV IgG和IgM的最佳血清稀释度和抗原浓度.在此基础上检测60份DENV阳性血清和30份阴性血清中IgG和IgM,计算特异性和敏感性,并与国内、外商品化DENV抗体检测试剂盒比较.结果 获得纯化的重组E蛋白抗原E-1-G5,浓度可达1 570 μg/mL;以其进行间接ELISA法检测DENV IgG时最佳包被抗原浓度为6 μg/mL,检测IgM时最佳包被抗原浓度为8 μg/mL,最佳检测血清稀释度均为1∶100.重组E-1-G5检测DENV IgG敏感性为90.0％、特异性为86.7％,ROC曲线下面积(AUC)为0.985;检测IgM敏感性为83.3％、特异性为93.3％,AUC为0.955.重组E-1-G5检测DENV IgG的敏感性明显高于国内T3 kit(90.0％vs.78.3％,P＜0.01),特异性比T3 kit稍低(86.7％vs.90.0％,P＜0.05);而相较国外T1、T2kit对IgG、IgM的检测敏感性、特异性稍低.结论 建立的基于DENV E-1-G5间接ELISA方法,检测血清中DENV IgG和IgM均具有较好的敏感性和特异性.本方法将有助于DENV感染以及初次/再次感染的辅助判断,具有潜在的应用价值.

登革病毒;E蛋白;IgG;IgM;间接ELISA

赵晨峰;王念;甘慧泉;陈玥;孙九峰;黄艳

中山大学中山医学院,广东广州510080;中山大学热带病防治研究教育部重点实验室,广东广州510080;广东省媒介生物防控工程技术研究中心,广东广州510080;广东省医学科学院,广东省人民医院,广东广州510080;广东省公共卫生研究院,广东广州511430

热带医学杂志

[1]赵晨峰;王念;甘慧泉;陈玥;孙九峰;黄艳-.基于E蛋白间接ELISA检测登革病毒抗体方法的建立)[J].热带医学杂志,2022(04):445-450

DENVIgG,T2kit

登革病毒,基因工程,联合检测,人血清,IgM,密码子优化,编码序列,原核表达,质粒,pET,28a,G5,转入,大肠杆菌,BL21,DE3,亲和层析,棋盘,滴定法,阳性血清,外商,商品化,抗体检测,检测试剂盒,行间,包被抗原,稍低,再次感染

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