典型文献
基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌的构建与应用
文献摘要：
[背景]传统外源蛋白的原核表达通常需要以超声破碎或者酶解的方式破碎菌体,过程比较烦琐.[目的]构建基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌,以简化外源蛋白的获取流程.[方法]从MS2噬菌体中克隆lys基因,构建重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,以此构建质粒型条件自溶菌,通过生长曲线和菌落形成单位反映自溶菌裂解效率,利用SDS-PAGE检测外源蛋白释放情况.[结果]构建了 pBAD-lys BL21(DE3)、pBAD-Opti-lys BL21(DE3)及pCDF-BAD-Opti-lys BL21(DE3)这3种质粒型条件自溶菌.以上自溶菌在阿拉伯糖诱导后其宿主裂解效率均为99.99％以上,CFU结果显示含pCDF-BAD-Opti-lys质粒的宿主裂解效果更优,在此自溶菌BL21(DE3)中表达含His标签的重组绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP),经阿拉伯糖诱导后菌体中约63.00％以上的eGFP释放至胞外,利用Ni-NTA可以直接从培养基中纯化得到约30 kDa的单一目的蛋白.[结论]基于MS2噬菌体lys基因成功构建了阿拉伯糖诱导的质粒型条件自溶菌,此自溶菌能够以自我裂解的方式释放大部分胞内外源蛋白,简化传统外源蛋白获取流程.
文献关键词：
MS2噬菌体;lys;自溶菌;蛋白纯化
中图分类号：
作者姓名：
吕敏佳;刘捷婧;周于婷;陈萍;欧阳永长
作者机构：
广州医科大学生物化学与分子生物学教研室,广东广州511436;广州医科大学附属第二医院转化医学中心,广东广州510260
文献出处：
引用格式：
[1]吕敏佳;刘捷婧;周于婷;陈萍;欧阳永长-.基于MS2噬菌体lys基因的质粒型条件自溶菌的构建与应用)[J].微生物学通报,2022(11):4598-4607
A类：
lys,自溶菌,pCDF
B类：
MS2,噬菌体,质粒,粒型,构建与应用,外源蛋白,原核表达,超声破碎,酶解,比较烦,烦琐,化外,重组表达,大肠杆菌,BL21,DE3,异源表达,生长曲线,菌落形成单位,SDS,PAGE,放情,pBAD,Opti,上自,阿拉伯糖,宿主,CFU,His,绿色荧光蛋白,enhanced,green,fluorescent,protein,eGFP,NTA,kDa,目的蛋白,蛋白纯化
AB值：
0.219031
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
