为建立用于检测临床粪便样品中胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,L.intracellularis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究参考GenBank中发表的L.intracellularis PHE/MN1-00株基因组序列设计50对引物,通过SYBR Green Ⅰ荧光染料法PCR验证引物的特异性,针对扩增效率最好的特异性上、下游引物合成相应的TaqMan探针,优化反应条件,对其线性范围、敏感性和重复性进行验证,系统的完成了该方法的建立.结果表明,所建立的TaqMan荧光定量PCR方法,特异性强;在靶标核酸为2.95×101～2.95×106拷贝/μL区间线性关系良好,相关系数R2=0.998 1,扩增效率为96.51％;最低检测浓度为5拷贝/μL;批间和批内的CV均小于2％,重复性好.使用普通PCR方法与本方法对2020年10月至2021年2月采自江西地区猪场的373份粪便样品进行检测,L.intracellularis的总检出率分别为21.4％(80/373)和27.6％(103/373),显示本方法具有更高的敏感性,其检测场阳性率为88.9％(8/9),各阶段生产猪群阳性率分别为经产母猪28.7％、保育仔猪36.4％和育肥猪14.3％.该检测结果为江西地区的L.intracellularis的流行情况提供参考.

胞内劳森菌;TaqMan实时荧光定量PCR;检测

刘昌锦;魏黄思梧;胡换仪;肖童;林敏;刘小兰;边彦超;罗峰;邓舜洲

江西农业大学动物科学技术学院,江西南昌330045;江西金伊博生物科技有限公司,江西 南昌330013

中国兽医学报

[1]刘昌锦;魏黄思梧;胡换仪;肖童;林敏;刘小兰;边彦超;罗峰;邓舜洲-.胞内劳森菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用)[J].中国兽医学报,2022(04):680-685

Lawsonia,intracellularis

胞内劳森菌,TaqMan,建立及应用,粪便样品,GenBank,PHE,MN1,基因组序列,序列设计,引物,SYBR,Green,荧光染料,染料法,优化反应,反应条件,线性范围,靶标,拷贝,CV,江西地区,猪场,猪群,经产母猪,保育仔猪,育肥猪,流行情况

0.297924