典型文献
猪链球菌和副猪嗜血杆菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
文献摘要：
为建立一种能够同时检测猪链球菌(SS)和副猪嗜血杆菌(HPS)的方法,本实验根据GenBank中登录的SS gdh和HPS 16S rRNA基因保守序列分别设计并合成引物和探针,经优化反应体系和条件,初步建立了一种可以同时鉴别检测SS和HPS的双重TaqMan荧光定量PCR方法.分别以SS、HPS、支气管败血波氏杆菌(Bb)、金黄色葡萄球菌(SA)、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、无乳链球菌(GBS)基因为模板,利用该方法检测,结果显示,除SS、HPS外,与其他猪临床常见病原菌均无交叉反应,特异性强;利用建立的该双重TaqMan荧光定量PCR方法分别对10倍倍比稀释后的SS和HPS质粒标准品以及二者混合菌液检测,结果显示,该方法对SS和HPS质粒标准品的最低检测限分别为7.534×101拷贝/μL、6.350×101拷贝/μL,对细菌的最低检测限均为102 cfu/μL,敏感性较高;组内和组间重复性试验的变异系数均小于3％,表明该方法重复性较好.利用建立的该双重TaqMan荧光定量PCR、常规PCR和国标法对在河南地区不同养猪场收集的54份疑似SS和/或HPS感染的病料样品进行检测,结果显示,双重TaqMan荧光定量PCR和常规PCR检测的阳性率分别为38.89％(21/54)和31.48％(17/54),二者的总符合率为92.59％;国标法与建立的方法检测结果一致.本研究建立的双重TaqMan荧光定量PCR方法为临床SS和HPS的鉴别检测和流行病学调查提供了有力的技术手段.
文献关键词：
猪链球菌;副猪嗜血杆菌;双重TaqMan荧光定量PCR;检测
中图分类号：
作者姓名：
靳曼玉;高树基;李金朋;张小玲;丁轲;董发明;汪洋
作者机构：
河南科技大学动物科技学院,河南 洛阳 471000;洛阳市畜禽分子病原与免疫学重点实验室,河南 洛阳 471003
文献出处：
引用格式：
[1]靳曼玉;高树基;李金朋;张小玲;丁轲;董发明;汪洋-.猪链球菌和副猪嗜血杆菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用)[J].中国预防兽医学报,2022(10):1052-1058
A类：
B类：
猪链球菌,副猪嗜血杆菌,TaqMan,建立与应用,同时检测,SS,HPS,GenBank,登录,gdh,16S,rRNA,保守序列,并合,引物,优化反应,反应体系,鉴别检测,支气管败血波氏杆菌,Bb,金黄色葡萄球菌,SA,胸膜肺炎放线杆菌,无乳链球菌,GBS,常见病原菌,交叉反应,质粒,标准品,混合菌,菌液,检测限,拷贝,cfu,重复性试验,国标法,河南地区,养猪场,符合率,流行病学调查
AB值：
0.296251
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