为建立快速、特异、灵敏的鉴别伪狂犬病病毒(PRV)野毒株和疫苗株的方法,本试验基于PRV gB和gE基因保守区域序列,设计了 2对特异性的引物和探针,探针标记不同发光基团,以区分野毒株和疫苗株.通过对引物的筛选和反应条件的优化,建立了可鉴别PRV野毒株和疫苗株的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性和干扰性等进行评估.结果显示,该方法能同时特异性地检测出PRV野毒株和疫苗株,而与PPV、PCV2、PRRSV、CFSV、JEV等无交叉反应;该方法灵敏性高,对PRV gE和gB基因最低检测量分别为27.1 copies/μL和2.74 copies/μL;该方法重复性好,变异系数小于1％;用该方法对18份临床样本进行PRV gB和gE基因检测,且与普通PCR方法相比,符合率高达100％.结果表明,本试验建立的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法可用于临床样本中PRV野毒株和疫苗株的鉴别检测,为猪伪狂犬病防制和净化提供了一种有效的技术手段.

伪狂犬病病毒;gE基因;gB基因;实时荧光定量PCR

河南牧业经济学院动物医药学院,河南郑州450046;河南农业大学动物医学院,河南郑州450002;牧原食品股份有限公司,河南南阳473000

[1]吕玉金;张世军;吴凤笋;赵攀登;刘玲玲;李文刚;饶宝-.伪狂犬病病毒TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用)[J].中国兽医杂志,2022(05):22-28

CFSV

伪狂犬病病毒,TaqMan,初步应用,PRV,野毒株,疫苗株,gB,gE,引物,基团,分野,反应条件,灵敏性,干扰性,PPV,PCV2,PRRSV,JEV,交叉反应,copies,临床样本,基因检测,符合率,鉴别检测,猪伪狂犬病,防制

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