牛鼻病毒(BRV)是引起牛呼吸道疾病综合征(BRDC)的重要病原,分为基因A型(BRAV)和基因B型(BRBV).为建立同时检测BRAV和BRBV的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据BRAV 5'非翻译区(5'NTR)和BRBV 3'非翻译区(3'NTR)分别设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化各反应条件,初步建立了同时检测BRAV与BRBV的双重荧光定量RT-PCR方法.特异性试验结果显示,该方法仅对BRAV和BRBV检测为阳性,对其他常见牛呼吸道病原,包括D型流感病毒、牛冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒1型、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型、牛支原体、多杀性巴氏杆菌、溶血曼氏杆菌、大肠杆菌和沙门菌检测结果均为阴性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对BRAV和BRBV重组质粒标准品的检测下限均为3.2×101拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于5％,重复性较好.利用该方法与国外文献报道的3种BRAV荧光定量RT-PCR方法以及4种BRBV荧光定量RT-PCR方法同时检测43份BRDC患牛鼻拭子样品,结果显示该方法对BRAV和BRBV的检出率分别为32.56％(14/43)和30.23％(13/43),其他方法对BRAV的检出率分别为0(0/43)、2.33％(1/43)、23.26％(10/43),对BRBV的检出率分别为27.91％(12/43)、27.91％(12/43)、27.91％(12/43)、27.91％(12/43),表明本研究所建方法的检测性能较强.本研究首次建立了同时检测BRAV和BRBV的双重荧光定量RT-PCR方法,其特异性强、敏感性高、稳定性好,并且首次证实BRAV在中国的存在,为BRDC的防控提供了重要参考.

牛鼻病毒;基因A型;基因B型;双重荧光定量RT-PCR;混合感染

周昱行;汤承;岳华

西南民族大学畜牧兽医学院,四川 成都 610041

中国预防兽医学报

[1]周昱行;汤承;岳华-.基因A型和B型牛鼻病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用)[J].中国预防兽医学报,2022(10):1059-1065

牛鼻病毒,BRAV,BRBV

建立及应用,BRV,牛呼吸道疾病综合征,BRDC,同时检测,究根,翻译区,NTR,特异性引物,TaqMan,反应条件,呼吸道病原,牛冠状病毒,牛病毒性腹泻病毒,牛呼吸道合胞体病毒,牛副流感,副流感病毒,腺病毒,牛支原体,多杀性巴氏杆菌,溶血曼氏杆菌,大肠杆菌,沙门菌,敏感性试验,重组质粒,标准品,检测下限,拷贝,重复性试验,国外文献,鼻拭子,子样,其他方法,检测性能,首次建立,混合感染

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