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鸽Ⅰ型腺病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立
文献摘要：
为建立鸽Ⅰ型腺病毒(PIAdV-Ⅰ)的快速检测方法,本研究根据PIAdV-IFiber2基因的保守区域设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了快速检测PIAdV-Ⅰ的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(qPCR)方法.建立的SYBR Green Ⅰ qPCR方法的标准曲线结果显示,重组质粒标准品pMD19-Fiber在1×103 拷贝/μL～1×108拷贝/μL时和Ct值之间的线性关系良好,相关系数R2=0.995,扩增效率为90％.利用建立的qPCR方法对鸽Ⅱ型腺病毒(PIAdV-Ⅱ)Fiber 2基因保守区质粒标准品、鸽圆环病毒(PICV)、新城疫病毒(NDV)、多杀性巴氏杆菌(PM)和禽致病性大肠杆菌(APEC)的检测结果均为阴性,仅PIAdV-Ⅰ检测为阳性,特异性强;该方法对浓度为1×100拷贝/μL～1×108拷贝/μL的重组质粒标准品进行检测,结果显示最低检测限为1×102拷贝/μL,而普通PCR最低检测限为1×104拷贝/μL,表明qPCR方法的敏感性更强;该方法批内、批间重复性试验的变异系数分别小于1％和2％,重复性好.利用建立的qPCR方法和普通PCR方法对从呼和浩特市某赛鸽公棚随机采集的30份鸽肝脏样品进行PIAdV-Ⅰ检测,结果显示前者的阳性检测率为63.3％(19/30),普通PCR方法的阳性率为36.7％(11/30),两种方法的阳性符合率均为100％.本研究首次建立PIAdV-Ⅰ的qPCR检测方法,为鸽PIAdV-Ⅰ的感染提供了敏感、快速的检测手段.
文献关键词：
鸽Ⅰ型腺病毒;SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR;Fiber2基因
中图分类号：
作者姓名：
杨俊杰;韩晓语;刘春羽;王亚新;郭昊;温永俊;王凤雪
作者机构：
内蒙古农业大学兽医学院,农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,内蒙古 呼和浩特 010018
文献出处：
引用格式：
[1]杨俊杰;韩晓语;刘春羽;王亚新;郭昊;温永俊;王凤雪-.鸽Ⅰ型腺病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立)[J].中国预防兽医学报,2022(10):1066-1070
A类：
PIAdV,IFiber2,PICV
B类：
腺病毒,SYBR,Green,快速检测方法,究根,区域设计,特异性引物,优化反应,反应条件,qPCR,标准曲线,线结,重组质粒,标准品,pMD19,拷贝,Ct,鸽圆环病毒,新城疫病毒,NDV,多杀性巴氏杆菌,PM,禽致病性大肠杆菌,APEC,检测限,重复性试验,呼和浩特市,随机采集,检测率,符合率,首次建立,检测手段
AB值：
0.267577
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