典型文献
嗜热古菌Infirmifilum uzonense来源的双功能高温β-葡萄糖苷酶IuBgl3的原核表达及酶学性质分析
文献摘要：
β-葡萄糖苷酶在食品、医药、生物质转化等领域具有重要的应用价值,因此发掘适应性强、性质优良的β-葡萄糖苷酶是国内外研究热点.本研究从嗜热古菌Infirmifilumuzonense中成功克隆出一个GH3家族的β-葡萄糖苷酶基因,命名为Iubgl3.基因序列分析显示Iubgl3全长为2 109 bp,编码702个氨基酸,理论分子量为77.0 kDa.将该基因在大肠杆菌中进行克隆表达并对纯化后的IuBgl3进行酶学性质研究.结果显示,重组酶IuBgl3最适pH 5.0,最适温度85℃.该酶具有良好的热稳定性,80℃处理2 h后仍能保持85％以上的酶活力.其具有优良的pH稳定性,在pH 4.0-11.0范围内处理1 h,仍维持85％以上的酶活力.通过底物特异性测定发现,该酶对对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl β-D-glucoside,pNPG)和对硝基苯-β-D-吡喃木糖苷(p-nitrophenyl β-D-xylopyranoside,pNPX)均有很高的水解能力,是典型的双功能酶.以pNPG为底物时的动力学参数Km和Vmax分别为0.38 mmol和248.55 μmol/(mg·min),催化效率kcat/Km=6 149.20 s-1mmol-1.大多数金属离子对IuBg13的酶活力没有显著影响,SDS可导致酶完全失活,而EDTA却能提高30％的酶活力.本研究丰富了高温古菌GH3家族的β-葡萄糖苷酶基因,获得了一个稳定性优良的高温酸性双功能酶,具有良好的工业应用前景.
文献关键词：
嗜热古菌;GH3家族;β-葡萄糖苷酶;酶学性质;双功能酶
中图分类号：
作者姓名：
刘鑫涵;沈风飞;石鹏君;刘慧芹
作者机构：
天津农学院园艺园林学院,天津300392;江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045;中国农业科学院麻类研究所,湖南长沙410205;中国农业科学院农产品加工研究所,北京100193
文献出处：
引用格式：
[1]刘鑫涵;沈风飞;石鹏君;刘慧芹-.嗜热古菌Infirmifilum uzonense来源的双功能高温β-葡萄糖苷酶IuBgl3的原核表达及酶学性质分析)[J].生物工程学报,2022(12):4644-4657
A类：
嗜热古菌,Infirmifilum,uzonense,IuBgl3,Infirmifilumuzonense,Iubgl3,pNPX,IuBg13
B类：
葡萄糖苷酶,原核表达,酶学性质分析,生物质转化,质优,国内外研究热点,GH3,酶基因,基因序列分析,全长,bp,分子量,kDa,大肠杆菌,克隆表达,重组酶,热稳定性,酶活力,底物特异性,对对,硝基苯,吡喃,nitrophenyl,glucoside,pNPG,木糖,xylopyranoside,双功能酶,动力学参数,Km,Vmax,催化效率,kcat,1mmol,金属离子,离子对,SDS,失活,EDTA,工业应用
AB值：
0.266468
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