典型文献
COPII囊泡衣被蛋白SEC24A在巨自噬通路中的功能研究
文献摘要：
细胞自噬是一种重要且保守的细胞内降解过程,通过形成双层膜的自噬体包裹细胞内容物进行降解.内质网来源的COPII囊泡被认为是饥饿诱导的应激过程中自噬体的膜源.探究了COPII囊泡衣被蛋白SEC24A在巨自噬通路中的作用.利用siRNA干扰技术敲低SEC24A的表达,EBSS饥饿处理对照组和SEC24A敲低组HeLa细胞2 h诱导自噬发生,经Western blot和免疫荧光实验检测自噬底物蛋白p62和自噬标志蛋白LC3-II的蛋白水平变化,以确定SEC24A是否参与自噬.通过RFP-GFP-LC3串联荧光检测自噬体和自噬溶酶体的数目,利用蛋白酶K保护实验验证自噬缺陷发生在自噬体闭合之前或者之后,利用免疫荧光实验检测敲低SEC24A对自噬通路上ATG复合物的影响,以确定SEC24A调控自噬通路的位点.通过免疫共沉淀实验验证SEC24A与自噬相关蛋白ATG9A是否存在相互作用.蛋白检测实验发现,饥饿条件下与对照细胞相比,敲低SEC24A细胞内自噬底物蛋白p62积累,而标志蛋白LC3-II减少.RFP-GFP-LC3串联荧光实验显示,敲低SEC24A后自噬体及自噬溶酶体的数目均减少.蛋白酶K保护实验显示,SEC24A敲低细胞中受膜结构保护的p62和GFP-LC3均减少,提示SEC24A作用位点在自噬体闭合之前.免疫荧光实验显示,敲低SEC24A的表达后ATG14L、ATG16L1点状结构减少,而ATG9A点状结构的数量没有明显变化,提示SEC24A作用于ATG14L、ATG16L1上游.免疫共沉淀实验显示SEC24A与ATG9A存在相互作用.研究结果不仅有助于深化对自噬体形成过程和分子机制的了解,也为全面解读COPII囊泡及其衣被蛋白在自噬中的重要作用提供了信息.
文献关键词：
细胞自噬;COPII囊泡;SEC24A蛋白;ATG蛋白
中图分类号：
作者姓名：
赵云鹏;张浩林;熊倩倩;李雨婷;王娟
作者机构：
北京工业大学环境与生命学部,北京 100124
文献出处：
引用格式：
[1]赵云鹏;张浩林;熊倩倩;李雨婷;王娟-.COPII囊泡衣被蛋白SEC24A在巨自噬通路中的功能研究)[J].生物技术进展,2022(06):906-914
A类：
SEC24A,ATG9A,ATG14L
B类：
COPII,囊泡,衣被,巨自噬,自噬通路,功能研究,细胞自噬,胞内降解,降解过程,成双,双层膜,自噬体,内容物,内质网,饥饿,siRNA,干扰技术,敲低,EBSS,HeLa,blot,免疫荧光,实验检测,底物,p62,LC3,水平变化,RFP,GFP,荧光检测,自噬溶酶体,复合物,免疫共沉淀,自噬相关蛋白,蛋白检测,膜结构,ATG16L1,点状
AB值：
0.201774
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