目的 研究萝卜硫素(sulforaphane,SFN)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞自噬溶酶体形成的机制.方法 利用免疫荧光共聚焦技术观察溶酶体在非小细胞肺癌细胞A549中的亚细胞定位;使用高效液相色谱与质谱联用分析SFN(20μmol/L)处理A549细胞后蛋白质组的表达差异;分别使用不同浓度的SFN(0,10,20,30μmol/L)处理人非小细胞肺癌A549细胞,通过蛋白免疫印迹技术检测RILP蛋白的表达.利用TCGA及UNLCAN数据库分析肺癌组织与癌旁组织中RAB7交互溶酶体蛋白(RILP)及ATP6V0D1蛋白的差异表达;利用ONCOLNC数据库分析RILP及ATP6V0D1与肺癌患者生存期的关联;利用TCGA数据库分析在肺腺癌和肺鳞癌组织中RILP与自噬相关蛋白LC3Ⅱ、RILP与ATP6V0D1、ATP6V0D1与LC3Ⅱ的相关性;利用STRING数据库分析RILP蛋白与微管蛋白TUBB/TUBA1 A、LC3Ⅱ间的相互作用.结果 在SFN处理的A549细胞中观察到溶酶体发生核周聚集.液相色谱和质谱联用分析表明:在SFN处理的A549细胞中,380个蛋白表达上调,278个蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05).蛋白免疫印迹结果显示:随着SFN浓度(0,10,20,30μmol/L)的升高,RILP的表达显著上升(P<0.05).TCGA数据库结果显示:RILP、ATP6V0D1蛋白在非小细胞肺癌组织中低表达(P<0.05).与高表达RILP、ATP6V0D1蛋白的患者相比,低表达RILP、ATP6V0D1蛋白的肺癌患者生存期短(P<0.05).STRING数据库结果显示RILP蛋白与微管蛋白TUBB/TUBA1 A以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ相互作用.同时,TCGA数据库显示在肺腺癌和肺鳞癌组织中,RILP蛋白与ATP6V0D1蛋白的表达呈正相关(P<0.01),RILP蛋白与LC3Ⅱ蛋白的表达呈正相关(P<0.01),ATP6V0D1蛋白与LC3Ⅱ蛋白的表达呈正相关(P<0.01).结论 SFN通过上调RILP的表达,从而加强RILP与溶酶体ATP6V0D1蛋白及LC3Ⅱ的关联,抑制非小细胞肺癌细胞自噬溶酶体形成.

萝卜硫素;微管;自噬;凋亡;非小细胞肺癌;RAB7交互溶酶体蛋白(RILP);ATP6V0D1

张彤;周妍;吴巍

首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系,北京 100069

山西医科大学学报

[1]张彤;周妍;吴巍-.生物信息学分析萝卜硫素上调RAB7交互溶酶体蛋白与非小细胞肺癌细胞自噬的关联)[J].山西医科大学学报,2022(04):383-389

RAB7,RILP,UNLCAN,ATP6V0D1,ONCOLNC,TUBA1

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