目的:通过冬凌草甲素对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染巨噬细胞NOD样受体家族蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体及内质网应激的影响,探讨冬凌草甲素抗结核病理损伤的作用机制.方法:利用MTB标准株H37Ra建立小鼠巨噬细胞Raw264.7感染模型,设置空白对照组、MTB感染模型组、冬凌草甲素作用不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/L)及作用不同时间点(6、12、24 h)干预组.应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测冬凌草甲素的可用药物浓度.应用蛋白免疫印迹法检测NLRP3、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)表达情况;检测内质网应激相关蛋白免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、真核生物翻译起始因子2α(peIF2α)、磷酸化肌醇需要酶1α(pIRE1α)、肌醇需要酶1α(IRE1α)的表达情况;检测内质网应激下游核因子κB/磷酸化应激活化蛋白激酶/p38(NF-κB/pJNK/pp38)通路的变化,并采用Image J软件做蛋白定量分析.结果:冬凌草甲素在4.0 μmol/L浓度以下细胞生存率在90％左右,对细胞毒性较小.在不同时间点(12、24h),与MTB感染模型组相比,冬凌草甲素可明显降低 NLRP3 蛋白表达(4.35±0.13 vs.5.95±0.15;1.90±0.05 vs.3.93±0.09),明显降低 TXNIP蛋白表达(1.14±0.05vs.1.73±0.04;0.78±0.05vs.1.33±0.02),差异均有统计学意义(F值分别为508.308和166.278,P值均为0.000).在不同时间点(6、12 h),与MTB感染模型组相比,冬凌草甲素可明显降低Bip蛋白表达(1.85±0.07vs.2.27±0.07;0.97±0.03 vs.2.28±0.17),明显降低 peIF2α 蛋白表达(1.75±0.42 vs.1.75±0.03;1.31±0.04 vs.2.45±0.17),明显降低 IRE1α 蛋白表达(10.48±0.40 vs.14.19±0.45;6.15±0.15 vs.15.76±1.27),明显降低 pp65 蛋白表达(0.69±0.01 vs.1.07±0.03;0.28±0.01 vs.0.39±0.02),差异均有统计学意义(F值分别为149.510、10.489、10.294、288.194,P值均＜0.01).结论:MTB感染小鼠巨噬细胞Raw264.7模型中,冬凌草甲素可通过调控内质网应激,抑制NLRP3炎症小体活化,发挥抗结核病理损伤的作用.

分枝杆菌;结核;巨噬细胞;冬凌草属;炎症介导素类;内质网

李银虹;刘芳琳;鹿振辉;姜昕

上海中医药大学基础医学院免疫学与病原生物学教研室,上海201203;陕西中医药大学针灸推拿学院,咸阳712046;上海中医药大学附属龙华医院肺病科,上海200032

中国防痨杂志

[1]李银虹;刘芳琳;鹿振辉;姜昕-.冬凌草甲素抗结核病理损伤的作用机制研究)[J].中国防痨杂志,2022(08):849-854

peIF2,pIRE1,pJNK,05vs,07vs,冬凌草属

冬凌草甲素,抗结核,结核病,病理损伤,过冬,结核分枝杆菌,Mycobacterium,tuberculosis,MTB,NOD,样受体,like,receptor,protein,NLRP3,炎症小体,内质网应激,标准株,H37Ra,小鼠巨噬细胞,Raw264,感染模型,空白对照,不同时间点,偶氮,氮唑,methyl,thiazolyl,tetrazolium,MTT,药物浓度,蛋白免疫印迹法,硫氧还蛋白互作蛋白,thioredoxin,interacting,TXNIP,免疫球蛋白,蛋白结合,结合蛋白,Bip,CCAAT,增强子,同源蛋白,CHOP,真核生物,翻译起始因子,磷酸化,肌醇,核因子,蛋白激酶,pp38,Image,细胞毒性,24h,pp65,炎症介导素类

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