寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)为蚊媒传播病原体,感染该病毒可引起寨卡病毒病,目前尚无特异治疗药物.自噬是细胞维持自身稳态、促进胞内物质能量再利用的过程,但常被一些病毒劫持以促进自身复制.本研究以人肝癌细胞系Huh7为靶细胞,利用mTagRFP-mWasabi-LC3双荧光报告系统检测自噬体的形成;蛋白免疫印迹法检测细胞感染ZIKV不同时间后自噬标记蛋白LC3和P62的表达情况;用自噬抑制剂(渥曼青霉素、氯喹)、Beclin-1特异的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和自噬激动剂雷帕霉素预处理细胞,再采用蛋白免疫印迹法和病毒空斑法检测其对病毒蛋白表达和胞外子代病毒含量的影响;采用蛋白免疫印迹法检测参与ZIKV感染自噬调节的信号通路.结果显示:ZIKV感染Huh7细胞后,LC3阳性自噬体的数量明显增多;自12 h开始,LC3-II的表达水平显著升高,P62蛋白表达水平在感染48 h后显著降低;两种自噬抑制剂处理和干扰Beclin-1表达均能有效抑制ZIKV感染和子代病毒的产生,而雷帕霉素处理增加了胞外子代病毒含量(P<0.05);ZIKV感染增强了腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)和TSC2发生磷酸化,而哺乳动物雷帕霉素靶标(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化水平下调.结果表明,ZIKV感染通过激活Huh7细胞中的AMPK/TSC2/mTOR信号通路诱导自噬,并利用自噬促进病毒复制和子代病毒的产生,这为研制以自噬相关分子为靶点的抗寨卡病毒药物提供了理论和实验依据.

寨卡病毒;自噬;病毒复制;AMPK/TSC2/mTOR信号通路

海军军医大学微生物学教研室,上海200433;海军军医大学海军特色医学中心人因工程与高新技术武器防护研究室,上海200433

[1]刘彬;姚秋凤;赵平;任浩;戚中田;秦照玲-.寨卡病毒感染人肝癌细胞诱导自噬以促进自身复制)[J].微生物与感染,2022(06):337-346

mTagRFP,mWasabi

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