目的:研究DNA甲基化在结核分枝杆菌（MTB）裂解物诱导CD4 +T细胞白细胞介素6受体（IL-6R）表达下调中的作用及机制。 方法:本研究属于前瞻性研究。收集并分选2019—2020年深圳市第三人民医院10名健康人（对照组）和10例结核病患者（TB组）外周血单个核细胞（PBMC）中CD4 +T细胞，亚硫酸氢盐测序法分析 IL-6R启动子区和3′非翻译区（UTR）区CpG岛甲基化变化；RT-qPCR和Western blotting分别检测IL-6R和DNA甲基转移酶（DNMT）表达；进一步通过MTB裂解物刺激anti-CD3/CD28抗体活化的对照组PBMC和Jurkat E6-1细胞，检测 IL-6R不同区域CpG岛甲基化和IL-6R、DNMT表达的变化；双荧光素酶报告基因系统检测 IL-6R 3′UTR区甲基化状态对其转录活性的影响；两组间采用非配对 t检验，三组及以上多组运用one-way ANOVA分析。 结果:在对照组和TB 组外周血CD4 +T细胞中，TB组中IL-6R表达低于对照组，而DNMT1和DNMT3B则高于对照组；且与对照组比， IL-6R启动子CpG岛甲基化水平差异无统计学意义；3′ UTR区CpG岛甲基化率分别为54.3%±4.7%和69.5%±3.4%，差异有统计学意义（ P<0.001）；在体外，MTB裂解物刺激活化对照组PBMC后，IL-6R表达低于未刺激的，而DNMT1和DNMT 3B表达高于未刺激的；同时CD4 +T细胞中 IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化率由58.9%±11.6%增加至79.4%±10.9%，差异有统计学意义（ P<0.001）；同样地，MTB刺激活化Jurkat E6-1细胞后的结果与对照组PBMC相一致。进一步发现DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后IL-6R 的表达均高于MTB 裂解物单独刺激的；DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨（5-aza）与MTB裂解物共处理后 IL-6R 3′ UTR区CpG岛甲基化水平低于MTB 裂解物单独刺激的，并且完全非甲基化修饰的 IL-6R 3′UTR报告基因的转录活性高于完全甲基化修饰的 IL-6R 3′ UTR区CpG岛。 结论:MTB裂解物刺激通过诱导CD4 +T细胞 IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化抑制 IL-6R转录活性进而下调其表达；MTB诱导CD4 +T细胞 IL-6R 3′UTR区CpG岛高甲基化可能与DNMT1、DNMT3B表达增加有关。

分枝杆菌，结核;DNA甲基化;CD4 +T细胞 ;IL-6R

莫斯维;朱传智;刘晓倩;万浩强;李富祥;邓国防;张宗德;陈心春

深圳大学医学院病原生物学教研室，深圳518061;首都医科大学附属北京胸科医院分子生物学实验室　耐药结核病研究北京市重点实验室　北京市结核病胸部肿瘤研究所，北京101149;暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院龙华分院中心实验室，深圳518120;深圳市第三人民医院肺二科，深圳518112

中华结核和呼吸杂志

[1]莫斯维;朱传智;刘晓倩;万浩强;李富祥;邓国防;张宗德;陈心春-.结核分枝杆菌对CD4 +T细胞白细胞介素6受体3′非翻译区甲基化的作用及机制研究 )[J].中华结核和呼吸杂志,2022(04):379-386

结核分枝杆菌,CD4 ,+T,翻译区,MTB,裂解物,6R,前瞻性研究,分选,第三人,健康人,结核病,外周血单个核细胞,PBMC,亚硫酸氢盐,启动子区,UTR,CpG,qPCR,blotting,anti,CD3,CD28,Jurkat,E6,双荧光素酶报告基因,系统检测,甲基化状态,转录活性,one,way,ANOVA,DNMT1,DNMT3B,甲基化水平,样地,相一致,甲基转移酶抑制剂,地西他滨,aza,共处理,甲基化修饰,高甲基化

0.170108