目的:探讨缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Caco-2细胞屏障损伤中的作用,并探究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)/P70核糖体蛋白S6激酶(P70 ribosomal protein S6 kinase,P70S6K)信号通路的调控机制.方法:实验分成两部分,第一部分通过使用HIF-1α激活剂、抑制剂分别处理LPS作用的Caco-2细胞,探讨HIF-1α在LPS诱导的Ca?co-2细胞屏障损伤中的作用;第二部分则分别采用mTOR抑制剂、激活剂与HIF-1α激活剂、抑制剂联合处理LPS作用的Caco-2细胞,探讨HIF-1α影响LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤的分子机制.分别采用ERS-2电阻仪测量跨膜电阻,荧光法测量荧光右旋糖苷(FD4)浓度,Western blot检测HIF-1α、p-mTOR、p-P70S6K和紧密连接结构蛋白(ZO-1、occludin及claudin-1)的表达.结果:LPS诱导Caco-2细胞损伤,表现为跨上皮细胞电阻值(transepithelial cell re?sistance,TEER)降低,FD4浓度上升;HIF-1α激活剂DMOG可增加LPS作用的Caco-2细胞TEER、降低FD4浓度,同时上调HIF-1α和紧密连接结构蛋白的表达(P<0.05),而HIF-1α抑制剂BAY87-2243的作用则与DMOG作用相反;mTOR抑制剂雷帕霉素可降低LPS作用的Caco-2细胞TEER、增加FD4浓度,同时下调p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α及紧密连接结构蛋白的表达(P<0.05),而mTOR激活剂MHY1485则可增加LPS作用的Caco-2细胞TEER、降低FD4浓度,上调Caco-2细胞中p-mTOR和p-P70S6K表达水平(P<0.05),但不影响HIF-1α和紧密连接结构蛋白的表达水平.在雷帕霉素基础上加入DMOG,雷帕霉素对LPS处理的Caco-2细胞的效应被逆转;而在MHY1487基础上加入BAY87-2243,MHY1487对LPS处理的Caco-2细胞的效应被逆转.结论:HIF-1α可减轻LPS诱导的Caco-2细胞屏障损伤,其作用受mTOR/P70S6K信号通路调节.

脓毒症;肠道上皮损伤;低氧诱导因子1α;mTOR/P70S6K信号通路

姚刘旭;滕文彬;黄素琴;李玉红;蒋宗明

绍兴文理学院医学院,浙江绍兴312000;浙江大学医学院附属第一医院麻醉科,浙江杭州310000;树人大学树兰国际医学院附属树兰(杭州)医院麻醉科,浙江杭州310004;绍兴文理学院医学院附属第一医院麻醉科(绍兴市人民医院),浙江绍兴312000

中国病理生理杂志

[1]姚刘旭;滕文彬;黄素琴;李玉红;蒋宗明-.mTOR/P70S6K/HIF-1α信号通路在脂多糖诱导Caco-2细胞屏障损伤中的作用及机制)[J].中国病理生理杂志,2022(01):122-129

BAY87,MHY1487,肠道上皮损伤

mTOR,P70S6K,HIF,脂多糖,Caco,细胞屏障损伤,缺氧诱导因子,hypoxia,inducible,lipopolysaccharide,LPS,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白,mammalian,rapamycin,target,protein,核糖体蛋白,ribosomal,kinase,调控机制,第一部,激活剂,别处,第二部,分则,联合处理,ERS,跨膜电阻,荧光法,右旋,糖苷,FD4,blot,紧密连接,连接结构,结构蛋白,ZO,occludin,claudin,细胞损伤,跨上,上皮细胞,电阻值,transepithelial,cell,re,sistance,TEER,DMOG,时下,MHY1485,可减轻,脓毒症,低氧诱导因子

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