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牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立
文献摘要：
目的 建立一种区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒感染株的双重荧光定量PCR方法.方法 分别以布鲁氏菌4型分泌系统中VirB8基因、VirB12基因序列设计2对引物及探针,优化实时荧光PCR反应体系及条件.以牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株、牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株、大肠杆菌、沙门氏菌基因组DNA进行Realtime-PCR扩增,评价该方法特异性.分别构建布鲁氏菌VirB12基因和VirB8基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行Realtime-PCR扩增,测定该方法的敏感性.结果 本方法具有良好的特异性,牛种布鲁氏菌A19疫苗株、羊种布鲁氏菌M5疫苗株以及猪种布鲁氏菌S2疫苗株基因组DNA同时出现VirB8基因与VirB12基因阳性扩增,牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株仅出现VirB8基因阳性扩增,大肠杆菌、沙门氏菌均未扩增出 目的条带,对VirB8基因及VirB12基因片段阳性质粒的检测限分别为约102copies/μL和103 copies/μL.该方法仅用于鉴别区分牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗株与布鲁氏菌野毒株.结论 本研究建立的布鲁氏菌双重Realtime-PCR方法,具有良好的特异性和敏感性,为今后鉴别牛种布鲁氏菌A19-△VirB12分子标记疫苗免疫牛与 自然感染牛提供技术支撑.
文献关键词：
布鲁氏菌;标记疫苗;荧光定量PCR;建立
中图分类号：
作者姓名：
马晓菁;叶锋;刘丽娅;谷文喜;钟旗;易新萍
作者机构：
新疆畜牧科学院兽医研究所,乌鲁木齐 830011;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐 830052
文献出处：
引用格式：
[1]马晓菁;叶锋;刘丽娅;谷文喜;钟旗;易新萍-.牛种布鲁氏菌A19-△VirB12标记疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立)[J].中国人兽共患病学报,2022(07):638-642
A类：
VirB12,VirB8
B类：
A19,标记疫苗,疫苗株,野毒感染,分泌系统,基因序列,序列设计,引物,反应体系,羊种布鲁氏菌,M5,S2,大肠杆菌,沙门氏菌,Realtime,法特,质粒,条带,检测限,102copies,别区,野毒株,分子标记,疫苗免疫,自然感染
AB值：
0.16578
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