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抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定
文献摘要：
目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定.方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测mAb纯度;ELISA测定mAb效价;SPR测定mAb的亲和力;BCA法检测mAb浓度;CCK-8法检测T细胞增殖情况;ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围;使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析.结果:从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因,筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株;细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×105左右,亲和力为3.72×10?9 kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用;表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合.结论:本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗,可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础.
文献关键词：
B7-H4;嵌合抗体;抗体表位;T细胞增殖
中图分类号：
作者姓名：
范振军;张文婷;张丽;张俊爱;赵祖国;徐军发
作者机构：
广东医科大学医学技术学院检验医学研究所,东莞523808;广东医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室,东莞523808
文献出处：
引用格式：
[1]范振军;张文婷;张丽;张俊爱;赵祖国;徐军发-.抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定)[J].中国免疫学杂志,2022(22):2763-2769
A类：
mAB,IgC,抗体表位
B类：
B7,H4,嵌合抗体,单克隆抗体,mAb,生物学功能,杂交瘤细胞株,可变区,基因序列,建表,达人,表达载体,转染,CHO,K1,稳定表达,SDS,PAGE,效价,SPR,亲和力,BCA,CCK,blot,Discovery,Studio,单抗,细胞培养,养上,上清,ml,kD,Fc,氢键,疏水作用,地阻,细胞增殖抑制作用,抗体药物,药物研发
AB值：
0.264073
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