基于细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p27Kip1信号通路探究异钩藤碱(isorhynchophylline,IRN)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的作用及机制.C57BL/6J小鼠48只,随机正常组、BLM组、BLM+IRN(10、20 mg/kg)两个剂量组,每组12只.气管注射BLM(5 000 U/kg)诱导PF小鼠模型,造模后连续灌胃给药21天.HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况.免疫组化检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的表达.体外培养小鼠原代肺成纤维细胞,实验设对照组、转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)(10 ng/mL)组和 TGF-β1+IRN(5、10、20 μmol/L)三个剂量组.EdU 掺入法和流式细胞术检测细胞增殖,Transwell观察细胞的迁移能力.RT-qPCR检测肺组织或肺成纤维细胞TGF-β1、col-lagen I 和 α-SMA mRNA 的表达.Western blot 检测肺组织和(或)肺成纤维细胞 TGF-βl、collagen I、α-SMA、p-ERK1/2,p27Kip1、CDK2和Cyclin E1的蛋白水平.动物实验结果显示,与BLM组相比,不同剂量IRN均能明显减轻肺组织结构的损伤、降低炎症细胞的浸润和胶原的沉积;此外,IRN不同程度地降低肺组织TGF-β1、collagen I和α-SMA mR-NA 和蛋白的表达;同时,IRN还抑制了肺组织ERK1/2的磷酸化、上调p27Kip1和下调CDK2和Cyclin E1的蛋白表达.细胞实验结果显示,与TGF-β1组相比,不同剂量IRN能够明显抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、显著降低细胞迁移能力;明显降低TGF-β1诱导的collagen I和α-SMA mRNA和蛋白的表达,同时降低ERK1/2的磷酸化水平、上调p27Kip1和下调CDK2和Cyclin E1的蛋白表达.以上结果表明IRN可能通过抑制ERK1/2信号通路、上调p27Kip1的表达而抑制了肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,从而减轻了 BLM诱导的PF.

异钩藤碱;ERK1/2;p27Kip1;肺纤维化

陈晓;李泽朋;何晓伟;李先伟

皖南医学院药学院药理学教研室;安徽省皖南植物药活性物质筛选与再评价工程实验室,芜湖241002

天然产物研究与开发

[1]陈晓;李泽朋;何晓伟;李先伟-.异钩藤碱调控ERK/p27Kip1信号通路改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化)[J].天然产物研究与开发,2022(05):750-760

p27Kip1,isorhynchophylline,BLM+IRN,1+IRN

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