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基于CRISPR/Cas9系统建立SNX11基因敲除A549细胞系
文献摘要：
为了建立SNX11基因稳定敲除A549细胞系,本研究通过构建针对人SNX11基因的特异性打靶慢病毒载体,将该慢病毒感染A549细胞系,使用嘌呤霉素对慢病毒感染阳性的A549细胞进行筛选,利用梯度稀释法获得单细胞并扩增培养,提取细胞基因组DNA,PCR扩增后进行测序验证,同时提取细胞蛋白后利用Western Blot方法进行蛋白敲除验证,最后进行细胞活性检测和脱靶效应评估.最后,本研究获得了一株SNX11基因敲除A549细胞系;通过脱靶效应评估,结果显示最可能的20个脱靶位点均不存在脱靶现象;该基因敲除对细胞增殖活性没有影响.本研究成功构建了一株SNX11基因敲除A549细胞系,为SNX11蛋白的功能研究建立了细胞模型.
文献关键词：
CRISPR/Cas9;SNX11;基因敲除细胞系
中图分类号：
作者姓名：
刘铁柱;李阿茜;李川;梁米芳;王世文
作者机构：
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206
文献出处：
引用格式：
[1]刘铁柱;李阿茜;李川;梁米芳;王世文-.基于CRISPR/Cas9系统建立SNX11基因敲除A549细胞系)[J].病毒学报,2022(03):652-657
A类：
SNX11,基因敲除细胞系
B类：
CRISPR,Cas9,A549,打靶,慢病毒载体,慢病毒感染,嘌呤霉素,梯度稀释法,单细胞,扩增培养,同时提取,Blot,细胞活性,活性检测,脱靶效应,效应评估,一株,靶位,细胞增殖活性,功能研究,细胞模型
AB值：
0.220897
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