目的:对艰难拟梭菌630（Cd630）菌株和致病决定区基因座（PaLoc）敲除突变株（ΔPaLoc）进行转录组测序和分析，获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱，并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力，为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫苗奠定基础。方法:对Cd630菌株和ΔPaLoc敲除突变株进行转录组测序，接着对差异表达基因进行筛选，随后对差异基因进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。最后在非洲绿猴肾细胞（Vero）和人克隆结肠腺癌细胞株（Caco-2）中进行Cd630野生型菌株和ΔPaLoc敲除突变菌株的细胞毒性验证实验。结果:转录组数据表明ΔPaLoc突变株毒素基因 tcdA、 tcdB未转录。 CD630_36010、 CD630_020910、 CD630_02080和 cel等基因分别上调17.92、11.40、8.93和7.55倍；编码高丝氨酸脱氢酶的 hom2基因、孢子形成蛋白基因 CD630_15810、锌结合脱氢酶基因 CD630_23230、1-磷酸半乳糖醇 5-脱氢酶基因 CD630_23240分别下调为野生型的0.06、0.075、0.133和0.183倍。GO和KEGG富集分析结果表明，ΔPaLoc突变株差异转录基因主要富集于密度感应系统、ABC运输系统、双组分系统、磷酸转移酶（PTS）系统、糖代谢通路以及万古霉素耐药相关的通路等。细胞毒力实验结果表明野生型Cd630菌株对Vero细胞和Caco-2细胞具有毒力，ΔPaLoc突变株丧失对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力。 结论:通过对Cd630和ΔPaLoc突变株进行转录测序，表明毒素基因未转录，其他差异性基因可为进一步研究ΔPaLoc突变株生理生化特征提供指引。细胞毒力实验表明，ΔPaLoc突变株丧失了对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力，ΔPaLoc突变株为艰难拟梭菌全菌减毒疫苗的构建奠定了基础。

基因敲除技术;规律间隔成簇短回文重复序列;细菌毒素;艰难拟梭菌;减毒突变体

崔古贞;周青帅;程钦全;饶凤琴;程玉梅;田艳;张婷;陈峥宏;廖健;官志忠;齐晓岚;吴棋;洪伟

贵州医科大学，贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室，贵阳　550004;贵州医科大学，地方病与少数民族疾病教育部重点实验室　&　贵州省医学分子生物学重点实验室，贵阳　550001;同济大学附属第十人民医院检验科，上海　200072;贵州医科大学附属医院综合ICU，贵阳　550001;贵州省建设职业技术学院，清镇　551400;贵州医科大学附属口腔医院，贵阳　550001

中华预防医学杂志

[1]崔古贞;周青帅;程钦全;饶凤琴;程玉梅;田艳;张婷;陈峥宏;廖健;官志忠;齐晓岚;吴棋;洪伟-.艰难拟梭菌PaLoc致病决定区基因座敲除突变株转录组学分析及其减毒验证)[J].中华预防医学杂志,2022(05):601-608

PaLoc,Cd630,CD630,hom2,减毒突变体

艰难拟梭菌,基因座,突变株,转录组学分析,转录组测序,野生型,差异性表达,表达谱,细胞毒力,减毒疫苗,差异表达基因,差异基因,基因本体,京都基因与基因组百科全书,富集分析,肾细胞,Vero,结肠腺癌,癌细胞,细胞株,Caco,细胞毒性,验证实验,转录组数据,毒素基因,tcdA,tcdB,cel,高丝氨酸,孢子,成蛋白,酶基因,半乳糖,乳糖醇,别下,调为,差异转录基因,密度感应系统,ABC,运输系统,双组分系统,转移酶,PTS,糖代谢,代谢通路,万古霉素耐药,有毒,生理生化特征,基因敲除技术,规律间隔成簇短回文重复序列,细菌毒素

0.226881