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基于CRISPR/Cas9技术的重组病毒HSV-2-EGFP的构建
文献摘要：
目的:利用CRISPR/Cas9 (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeat/CRISPR-associated nuclease 9)技术构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)基因的单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus 2，HSV-2)。方法:利用CRISPR/Cas9技术对外源基因EGFP插入HSV-2基因组的策略进行探索，设计如下4种插入策略：(1)经典的同源重组修复模式，即环状双侧同源臂供体介导的基因敲入；(2)线性化单侧同源臂供体介导的基因敲入；(3)同源性非依赖介导的基因敲入；(4)利用稳表达Cas9和sgRNA的细胞株，进行环状双侧同源臂供体介导的基因敲入。结果:使用策略2、3和4均成功构建了携带EGFP的HSV-2，其中策略2的基因敲入效率最高，然后依次为策略3、策略4，策略1未观察到重组病毒的产生。蚀斑纯化后的重组病毒在7代内能稳定表达绿色荧光蛋白，并且和亲本株在Vero细胞上具有相似的生长特性。结论:线性化单侧同源臂供体介导的基因敲入效率更高，敲除载体的稳转细胞株能够有效地提高同源重组修复机制介导的基因敲入效率。
文献关键词：
CRISPR/Cas9;单纯疱疹病毒2型;非同源末端连接;同源重组
中图分类号：
作者姓名：
苏文浩;任秀秀;赵婷婷;王轶男;李实实;黄秋芳;王晓杰;张晓焕;卫江波
作者机构：
国药中生生物技术研究院疱疹病毒实验室，北京 101111
文献出处：
引用格式：
[1]苏文浩;任秀秀;赵婷婷;王轶男;李实实;黄秋芳;王晓杰;张晓焕;卫江波-.基于CRISPR/Cas9技术的重组病毒HSV-2-EGFP的构建)[J].中华微生物学和免疫学杂志,2022(05):369-375
A类：
B类：
CRISPR,Cas9,重组病毒,HSV,EGFP,clustered,regularly,interspaced,short,palindromic,repeat,associated,nuclease,技术构建,增强型绿色荧光蛋白,enhanced,green,fluorescent,protein,单纯疱疹病毒,herpes,simplex,virus,外源基因,计如,同源重组修复,修复模式,供体,基因敲入,线性化,同源性,sgRNA,使用策略,中策,内能,稳定表达,和亲,亲本株,Vero,生长特性,敲除载体,稳转细胞株,修复机制,非同源末端连接
AB值：
0.382787
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