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弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV工程菌的构建
文献摘要：
为提高弗氏链霉菌对泰乐菌素的产素能力,构建了弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV基因工程菌.本研究以弗氏链霉菌作为出发菌株,并以其全基因组DNA为模板分别扩增tylF和tylE以及tylCV基因、以质粒pSET152为模板扩增强启动子基因permE,采用重叠延伸PCR技术和EcoRV、XbaI双酶切结合的连接方法,构建弗氏链霉菌表达载体pSET152-permE-tylF-tylE-tylCV,并转化至大肠杆菌ET12567,利用大肠-链霉菌属间接合转移技术获得工程菌株.研究结果表明,工程菌株摇瓶效价(14580 u/mL)比出发菌株(11318 u/mL)提高了29％;液相色谱结果显示,工程菌株的泰乐菌素A和泰乐菌素C相对峰面积显著(P≤0.05)高于出发菌株.增加弗氏链霉菌tylF、tylE和tylCV的拷贝数可有效提高泰乐菌素的产量,以及优化组分,为泰乐菌素生产菌的遗传改造提供参考.
文献关键词：
泰乐菌素;弗氏链霉菌;tylE基因;tylF基因;tylCV基因
中图分类号：
作者姓名：
陈亚兰;牛春;张萍
作者机构：
宁夏泰瑞制药股份有限公司,银川750101
文献出处：
引用格式：
[1]陈亚兰;牛春;张萍-.弗氏链霉菌双拷贝串联基因tylF、tylE和tylCV工程菌的构建)[J].中国兽药杂志,2022(08):16-23
A类：
弗氏链霉菌,tylF,tylE,tylCV,pSET152,permE,EcoRV,ET12567
B类：
泰乐菌素,基因工程菌,全基因组,质粒,启动子,XbaI,双酶,切结,表达载体,大肠杆菌,属间,接合转移,技术获得,工程菌株,摇瓶,效价,比出,峰面积,拷贝数,遗传改造
AB值：
0.149536
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