目的 针对G-菌外膜阻挡裂解酶发挥作用的情况,设计抗菌肽-裂解酶双机制抗菌蛋白,并优化表达体系,获得可溶性表达的抗菌蛋白质.方法 采用同源模建方法将绵羊骨髓细胞抗菌肽与源自噬菌体JD010的裂解酶融合设计新的抗菌蛋白质(SMAP-Lysin).通过构建pET30a、pBV220表达载体的方式,利用小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)的促溶作用,促进SMAP-Lysin的可溶性表达.结果 仅在pBV220载体上,SMAP-Lysin有明显的表达,但其表达过程会诱导宿主细菌的死亡,无法有效分离纯化目标蛋白质;通过SUMO标签的促溶作用,可实现SMAP-Lysin的融合表达,且SUMO肽段的融合避免了宿主细菌的死亡;采用亲和层析,酶切步骤处理后,可得到纯化的抗菌蛋白质SMAP-Lysin.结论 大肠杆菌是用于表达重组蛋白质的重要工程菌,采用SUMO标签融合表达的方式可有效降低抗菌蛋白对表达菌宿主的毒性,提高抗菌蛋白的可溶性表达,有利于抗菌蛋白的纯化.

绵羊骨髓细胞抗菌肽;裂解酶;双机制;抗菌蛋白;重组蛋白;小分子泛素样修饰蛋白标签;可溶性表达;革兰氏阴性菌

四川大学华西药学院,四川成都610041

[1]汪婷婷;戴佳咪;郑永祥;余蓉;张纯-.抗菌肽-裂解酶双机制抗菌蛋白质的设计与可溶性表达)[J].华西药学杂志,2022(01):6-10

绵羊骨髓细胞抗菌肽,JD010,Lysin,pBV220,小分子泛素样修饰蛋白标签

裂解酶,双机制,抗菌蛋白,可溶性表达,外膜,阻挡,表达体系,同源模建,自噬,噬菌体,融合设计,SMAP,pET30a,表达载体,SUMO,促溶,宿主,有效分离,分离纯化,融合表达,亲和层析,大肠杆菌,重组蛋白,工程菌,标签融合,高抗,蛋白的纯化,革兰氏阴性菌

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