目的:探讨黄芪甲苷(astragaloside IV,AST IV)对由氧化应激损伤引起的线粒体功能障碍以及细胞凋亡的作用及机制.方法:体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,用过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导建立氧化应激模型,分为PBS组、模型组(H2O2组)和H2O2+AST IV组.应用ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;用线粒体膜电位检测试剂盒JC-1检测细胞线粒体膜电位变化;应用Western blot法检测线粒体呼吸链上的complex I～V,分别为NADH:泛醌氧化还原酶亚基B8(NADH:ubiquinone oxidoreductase subunit B8,NDUFB8;complex I)、琥珀酸脱氢酶B(succinate dehydrogenase B,SDHB;complexⅡ)、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白2(ubiquinol-cyto-chrome C reductase core protein 2,UQCRC2;complexⅢ)、细胞色素C氧化酶I(mitochondrially encoded cytochrome C oxidase I,MTCO1;complex IV)和ATP合酶F1亚基α(ATP synthase F1 subunit alpha,ATP5A;complex V),检测线粒体动力学分裂蛋白——磷酸化发动蛋白相关蛋白1(phosporylated dynamin-related protein 1,p-Drp1)和线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission protein 1,Fis1),以及融合蛋白——线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)、Mfn2和视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy protein 1,OPA1),检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3;采用免疫荧光染色法检测NDUFB8和MTCO1表达;采用TUNEL染色检测细胞凋亡.结果:在200μmol/L H2O2诱导的SY5Y细胞氧化应激模型中,线粒体膜电位(P<0.01)和ATP水平(P<0.05)显著下调,呼吸链氧化磷酸化过程中NDUFB8、SDHB、ATP5A和MTCO1的表达均显著减少(P<0.05或P<0.01),线粒体分裂蛋白Fis1(P<0.05)和p-Drp1(P<0.01)蛋白水平显著升高,融合蛋白Mfn1、Mfn2和OPA1表达则显著降低(P<0.05或P<0.01),促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达量显著降低(P<0.01).AST IV能够显著提高细胞线粒体膜电位(P<0.01)和ATP水平(P<0.01),显著促进呼吸链氧化磷酸化过程中NDUFB8、SDHB、MTCO1、ATP5A及UQCRC2的表达(P<0.05或P<0.01),显著降低p-Drp1和Fis1蛋白水平(P<0.01),显著增加OPA1、Mfn1和Mfn2的表达(P<0.05或P<0.01),显著增加Bcl-2表达(P<0.05),显著降低Bax和cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.01).结论:AST IV能够保护神经元,其可能的机制是通过改善线粒体功能,调控线粒体动力学分裂/融合平衡,从而减轻氧化应激损伤导致的神经元凋亡.

黄芪甲苷;氧化应激;线粒体;SH-SY5Y细胞

于婧文;郭敏芳;李苏垚;孟涛;张海飞;杨德斌;宋丽娟;马存根;尉杰忠

山西大同大学脑科学研究所/附属第一医院神经科,山西大同037009;山西中医药大学国家中医药管理局多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心,山西晋中030619;山西医科大学生理学系,山西太原030001;山西大同市第四人民医院,山西大同037009

中国病理生理杂志

[1]于婧文;郭敏芳;李苏垚;孟涛;张海飞;杨德斌;宋丽娟;马存根;尉杰忠-.黄芪甲苷通过调控线粒体功能抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡)[J].中国病理生理杂志,2022(09):1553-1560

H2O2+AST,ubiquinol,mitochondrially,phosporylated

黄芪甲苷,SH,SY5Y,astragaloside,IV,氧化应激损伤,线粒体功能障碍,体外培养,人神,神经母细胞瘤,peroxide,PBS,检测试剂盒,线粒体膜电位,膜电位检测,JC,blot,检测线,线粒体呼吸链,complex,NADH,泛醌,氧化还原酶,亚基,ubiquinone,oxidoreductase,subunit,NDUFB8,琥珀酸脱氢酶,succinate,dehydrogenase,SDHB,细胞色素,核心蛋白,core,protein,UQCRC2,encoded,cytochrome,oxidase,MTCO1,synthase,alpha,ATP5A,线粒体动力学,发动蛋白,白相,dynamin,related,Drp1,线粒体分裂,fission,Fis1,融合蛋白,线粒体融合,mitofusin,Mfn1,Mfn2,视神经萎缩,optic,atrophy,OPA1,凋亡相关蛋白,Bcl,Bax,cleaved,caspase,免疫荧光染色法,TUNEL,氧化磷酸化,酸化过程,促凋亡蛋白,抗凋亡,保护神,神经元凋亡

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