目的 探讨登革2型病毒(DENV-2)对原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬小体形成、自噬体-溶酶体融合及溶酶体降解途径的影响.方法 于DENV-2感染HUVECs 36 h时,采用透射电子显微镜观察HU-VECs中自噬小体形成情况;于DENV-2感染HUVECs 12、24、36及48 h时,采用Western blot检测HUVECs中的微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达水平;于DENV-2感染2、4、6、8、10、12、18、24、30、36及48 h时,采用West-ern blot检测HUVECs中自噬选择性底物p62蛋白表达水平;于DENV-2感染后24、36及48 h,采用Western blot检测HUVECs中突触融合蛋白17(STX17)、突触体相关蛋白29(SNAP29)、囊泡相关膜蛋白8(VAMP8)的表达水平;采用溶酶体红色荧光探针(Lysotracker red)染色法观察DENV感染后HUVECs内溶酶体的pH变化;DENV-2感染HUVECs 24、36及48 h给予自噬抑制剂CQ处理或不处理的HUVECs中LC3-Ⅱ蛋白表达水平.结果 透射电子显微镜结果显示,DENV-2感染可诱导自噬小体的形成;Western blot结果显示,DENV感染后12、24、36及48 h时LC3-Ⅱ表达显著增高(P<0.05);p62表达水平在感染早中期无明显变化,30 h后显著增高(P<0.05),36 h到达峰值;DENV-2感染后各时间点STX17蛋白表达水平均降低(P<0.05);感染24 h时,SNAP29、VAMP8蛋白水平增高(P<0.05),但随后36 h和48h蛋白表达均下降(P<0.05);Lysotracker red染色结果和Western blot结果显示DENV-2感染阻碍了溶酶体正常酸化.结论 DENV-2感染可激活HUVEC自噬,诱导自噬小体的形成,但DENV-2阻碍了自噬-溶酶体融合,抑制溶酶体正常酸化.

登革病毒;人脐静脉内皮细胞;自噬;溶酶体;自噬流

胡盼;苟小琴;程瑶;李志阳;杨云巧;何慧;吴宁

贵州医科大学 基础医学院 化学与生物化学实验室,贵州 贵阳 550004;贵州医科大学 基础医学院 免疫学教研室,贵州 贵阳550004

贵州医科大学学报

[1]胡盼;苟小琴;程瑶;李志阳;杨云巧;何慧;吴宁-.DENV-2对HUVECs自噬小体形成和自噬体-溶酶体融合及溶酶体降解途径的影响)[J].贵州医科大学学报,2022(11):1274-1280,1287

VAMP8,Lysotracker

DENV,HUVECs,自噬小体,自噬体,溶酶体,降解途径,原代人脐静脉内皮细胞,透射电子显微镜,blot,微管,轻链,LC3,底物,p62,蛋白表达水平,突触,融合蛋白,STX17,SNAP29,囊泡,膜蛋白,红色荧光,荧光探针,red,染色法,内溶酶,自噬抑制剂,CQ,早中期,48h,染色结果,可激活,登革病毒,自噬流

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