目的 探讨碱基切除修复基因8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)对紫外线(UVB)诱导晶状体上皮细胞损伤(LEC)的保护作用.方法 通过UVB照射人LEC(SRA01/04细胞株)诱导细胞氧化损伤模型,利用siRNA敲降技术针对靶基因OGG1设计3个siRNA(分别为siOGG1#1、siOGG1#2和siOGG1#3).同时,为了验证出敲降效率最高的siOGG1,依据转染情况将细胞分为siOGG1#1组、siOGG1#2组、siOGG1#3组、siNC组和空白对照组(不转染).后续为了验证OGG1的表达下调对氧化损伤环境下细胞的作用,将细胞分为空白对照组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siOGG1#2组,观察各组细胞凋亡相关蛋白的表达变化.采用实时荧光定量-PCR检测各组细胞目的基因mRNA的表达,免疫印迹实验检测各组细胞相关蛋白的表达.免疫荧光法检测UVB+siNC组和UVB+si-OGG1#2组中受损DNA的标记物15A3的荧光强度变化.采用免疫荧光法检测细胞DNA氧化损伤情况,CCK8实验检测细胞活力.结果 实时荧光定量-PCR检测结果显示:UVB照射时间为10 min时,OGG1的相对表达量最高;免疫印迹实验检测结果显示:随着UVB照射时间的延长,细胞内OGG1蛋白相对表达量呈时间依赖性下降.因此,细胞氧化损伤模型采用UVB照射10 min处理细胞.实时荧光定量-PCR检测结果显示:与siNC组相比,靶向设计的转染siOGG1组的三个亚组中细胞OGG1 mRNA相对表达量均显著降低(均为P<0.001),siOGG1#2组降低最为明显.免疫荧光染色结果显示:与UVB+siNC组相比,UVB+siOGG1#2组15A3(染色反应底物是8-oxoG,它是OGG1的修复作用靶点)染色阳性细胞明显增多.CCK8实验结果显示:与UVB+siNC组和空白对照组相比,UVB+si-OGG1#2组细胞活力均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.01).免疫印迹实验检测结果显示:与UVB+siNC组相比,转染后UVB+siOGG1#2组细胞促进凋亡的蛋白BAX表达明显增加,而抑制凋亡的蛋白BCL-2表达则明显下降(均为P<0.001).结论 OGG1基因在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中通过BER通路参与受损DNA的修复过程,调控LEC内受损DNA的修复和细胞凋亡过程.

年龄相关性白内障;氧化损伤;紫外线;碱基切除修复基因;8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1

李鹏飞;罗家伟;康丽华;张国伟;茅馨木;吴安然;张文怡;管怀进

226001 江苏省南通市,南通大学附属医院眼科研究所

眼科新进展

[1]李鹏飞;罗家伟;康丽华;张国伟;茅馨木;吴安然;张文怡;管怀进-.碱基切除修复基因OGG1对紫外线诱导晶状体上皮细胞损伤的保护作用)[J].眼科新进展,2022(04):267-272

碱基切除修复基因,siOGG1#1,siOGG1#2,siOGG1#3,siOGG1,UVB+siNC,UVB+siOGG1#2,UVB+si,OGG1#2,15A3

紫外线,晶状体上皮细胞,细胞损伤,鸟嘌呤,糖苷酶,LEC,SRA01,细胞株,细胞氧化损伤,损伤模型,siRNA,对靶,靶基因,证出,转染,空白对照,凋亡相关蛋白,表达变化,目的基因,免疫印迹实验,实验检测,免疫荧光法,标记物,荧光强度,强度变化,伤情,CCK8,细胞活力,相对表达量,白相,时间依赖性,靶向设计,免疫荧光染色,染色结果,底物,oxoG,修复作用,作用靶点,阳性细胞,BAX,抑制凋亡,BCL,BER,修复过程,年龄相关性白内障

0.168054