目的:探讨沉默人类同源配对盒基因6(Pax6)对人晶状体上皮细胞(LECs)的生物学行为和上皮-间质转化(EMT)的作用。方法:将SRA01/04人LECs分为小干扰RNA-Pax6(siRNA-Pax6)组和siRNA阴性对照(siRNA-NC)组，siRNA-Pax6组细胞转染siRNA-Pax6，siRNA-NC组细胞转染无序siRNA。转染后24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率；转染后48 h，采用流式细胞术检测细胞凋亡比例和不同细胞周期细胞比例；转染后24 h，采用细胞划痕实验检测细胞迁移率；转染后48 h，采用实时荧光定量PCR检测细胞内Pax6、α-晶状体蛋白A(CRYAA)、α-晶状体蛋白B(CRYAB)、转录因子Sox2及EMT相关分子平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA相对表达量，采用Western blot法检测各组细胞中Pax6蛋白相对表达量。结果:2个组转染后不同时间点细胞存活率总体比较差异均有统计学意义( F分组＝4.776， P<0.05； F时间＝13.535， P<0.05)，其中转染后48 h和72 h，siRNA-Pax6组细胞存活率均明显低于siRNA-NC组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与siRNA-NC组比较，siRNA-Pax6组G 0/G 1期细胞比例明显增加，S期细胞比例明显减少，差异均有统计学意义( t＝9.971、-5.063，均 P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞迁移率为(19.73±6.07)%，低于siRNA-NC组的(70.56±2.97)%，差异有统计学意义( t＝-7.245， P<0.05)。siRNA-Pax6组细胞中Sox2和α-SMA mRNA相对表达量低于siRNA-NC组，E-cadherin mRNA相对表达量高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝-23.254、-5.294、6.062，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中CRYAA和CRYAB mRNA相对表达量明显高于siRNA-NC组，差异均有统计学意义( t＝5.521、8.270，均 P<0.01)。siRNA-Pax6组细胞中Pax6 mRNA相对表达量为0.27±0.01，低于siRNA-NC组的1.00±0.05，差异有统计学意义( t＝-14.456， P<0.001)；siRNA-Pax6组细胞中Pax6蛋白相对表达量为0.24±0.05，低于siRNA-NC组的1.14±0.10，差异有统计学意义( t＝-4.458， P<0.001)。 结论:沉默Pax6可抑制人LECs的增生及EMT过程，维持人LECs内正常晶状体蛋白的表达。

小干扰RNA;人类同源配对盒基因6;后发性白内障;人晶状体上皮细胞;上皮-间质转化

郑宇星;杨筱曦;易果果;吴淑端;冯志贞;夏朝霞

中山大学附属第六医院眼科，广州　510655

中华实验眼科杂志

[1]郑宇星;杨筱曦;易果果;吴淑端;冯志贞;夏朝霞-.小干扰RNA-Pax6对人晶状体上皮细胞生物学行为和上皮-间质转化的抑制作用)[J].中华实验眼科杂志,2022(06):499-506

同源配对,CRYAA

小干扰,Pax6,人晶状体上皮细胞,细胞生物学行为,间质转化,类同,LECs,EMT,SRA01,siRNA,NC,细胞转染,试剂盒,细胞存活率,流式细胞术,细胞周期,细胞划痕实验,实验检测,细胞迁移率,晶状体蛋白,CRYAB,Sox2,平滑肌肌动蛋白,SMA,黏附蛋白,cadherin,相对表达量,blot,白相,不同时间点,G ,可抑制,后发性白内障

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