目的 探讨环状核糖核酸泛素特异性肽酶36(circ USP36)靶向微小核糖核酸-326(miR-326)对高糖诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的影响.方法 RPE细胞ARPE-19根据高糖、circ USP36干扰表达载体(si-circ USP36)、miR-326抑制剂(anti-miR-326)、阴性对照(NC)等处理方法的不同,分为8个组:对照组(CG)、高糖组(HG)、si-circ USP36组 、si-NC组 、miR-326组 、miR-NC组 、si-circ USP36+anti-miR-326组 、si-circ USP36+anti-miR-NC组,培养细胞24 h.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ USP36和miR-326的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;双荧光素酶报告实验检测circ USP36和miR-326的靶向关系.结果(1)下调circ USP36对高糖作用的ARPE-19细胞凋亡、氧化应激的影响:与CG组比较,HG组circ USP36、凋亡率和MDA水平升高(tcirc USP36=53.199,t凋亡率=21.092,tMDA=22.867,均P=0.000),miR-326和SOD水平降低(tmiR-326=65.818,tSOD=15.362,均P=0.000);与HG组和si-NC组比较,si-circ USP36组circ USP36(tHG=14.241,tsi-NC=13.967,均P=0.000)、凋亡率(tHG=29.919,tsi-NC=22.849,均P=0.000)和MDA(tHG=14.174,tsi-NC=14.878,均P=0.000)水平降低,而miR-326(tHG=14.241,tsi-NC=13.967,均P=0.000)和SOD(tHG=12.571,tsi-NC=12.133,均P=0.000)水平升高,差异均有统计学意义.(2)circ USP36和miR-326靶向关系验证:过表达miR-326降低circ USP36的野生型荧光素酶载体(WT-circ USP36)的荧光素酶活性(t=11.232,P=0.000),差异有统计学意义,而对突变型荧光素酶载体(MUT-circ USP36)荧光素酶活性的影响无统计学意义(P>0.05).(3)miR-326对高糖作用的ARPE-19凋亡和氧化应激的影响:与miR-NC组相比,miR-326组的miR-326和SOD水平升高(tmiR-326=41.254,P=0.000;tSOD=8.413,P=0.001),细胞凋亡率和MDA水平降低(t凋亡率=17.547,tMDA=15.209,均P=0.000),差异均有统计学意义.(4)抑制miR-326对下调circ USP36处理的高糖作用的ARPE-19凋亡、氧化应激的影响:与si-circ USP36+anti-miR-NC组相比,si-circ USP36+anti-miR-326组的miR-326和SOD水平降低(t miR-326=33.486,tSOD=9.145,均P=0.000),而细胞凋亡率和MDA水平升高(t凋亡率=9.096,P=0.001;tMDA=12.360,P=0.000),差异均有统计学意义.结论 下调circ USP36可通过靶向调控miR-326减缓高糖诱导的RPE细胞凋亡和氧化损伤.

环状核糖核酸泛素特异性肽酶36;微小核糖核酸-326;高糖;视网膜色素上皮细胞;氧化应激

梁明明;冯冰

东南大学附属中大医院,南京210044

中国中医眼科杂志

[1]梁明明;冯冰-.下调circ_USP36靶向miR-326对高糖诱导的RPE细胞损伤的影响)[J].中国中医眼科杂志,2022(12):939-944

USP36,USP36+anti,tcirc,tMDA,tmiR,tSOD,tHG,tsi

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