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压力诱导兔视网膜干细胞向视网膜神经节细胞分化研究
文献摘要：
目的:探讨压力对与兔视网膜神经节细胞(RGCs)共培养的视网膜干细胞(RSCs)分化的影响。方法:选取SPF级新西兰孕22 d兔，取出胚胎，获取视网膜睫状缘色素上皮组织，培养原代RSCs。选取SPF级新生新西兰大白兔6只，分离视网膜神经上皮层组织，培养原代RGCs。采用巢蛋白(Nestin)抗体免疫荧光染色法、溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)流式细胞术分析、RSCs自发分化细胞免疫荧光检测及流式细胞术分析鉴定体外培养的兔RSCs，采用免疫荧光染色法以Brn3b抗体及Thy1.1抗体鉴定RGCs；将RGCs和RSCs分别放在Transwell的上下层培养，构建共培养体系。分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测0、20、40、60、80 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)压力条件下室RSCs及分化所得细胞的Nestin和Thy1.1 mRNA和蛋白表达变化。结果:体外培养的兔RSCs特异性标志物Nestin抗体染色阳性；BrdU流式细胞术分析结果显示，BrdU阳性细胞占分离RSCs细胞的(92.26±3.28)%；免疫荧光检测结果显示，RSCs分化细胞中，部分细胞Brn3b抗体表达阳性，部分细胞GS抗体表达阳性。流式细胞术双色分析结果显示，Brn3b和GS阳性细胞率分别为(13.00±3.06)%和(31.60±3.67)%。免疫荧光染色结果显示，体外培养的兔RGCs Brn3b抗体及Thy1.1抗体染色阳性。不同压力条件下RSCs及分化所得细胞的Nestin、Thy1.1 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(mRNA：
F＝127.600、137.400，均
P<0.01；蛋白：
F＝82.480、158.700，均
P<0.001)，其中与0 mmHg相比，20、40、60、80 mmHg条件下，Nestin mRNA及蛋白相对表达量降低，Thy1.1 mRNA及蛋白相对表达量增加，差异均有统计学意义(均
P<0.05)。40 mmHg时，Nestin mRNA和蛋白相对表达量最低，Thy1.1 mRNA和蛋白相对表达量最高。
结论:在一定范围内，压力能够促进与RGCs共培养的RSCs分化成视网膜神经节样细胞，压力过大会抑制RSCs的分化。
文献关键词：
视网膜;干细胞;视网膜神经节细胞;压力;细胞分化;青光眼
中图分类号：
作者姓名：
戴敏;亢泽峰;胡竹林;李妍
作者机构：
云南大学附属医院眼科 云南省眼科医院 云南省眼科研究所 云南省眼科疾病防治研究重点实验室 云南省第二人民医院白内障与眼底疾病防治省创新团队 云南省姚克专家工作站 云南省眼部疾病临床医学研究中心 云南省眼科疾病临床医学中心，昆明 650021;中国中医科学院眼科医院，北京 100040
文献出处：
引用格式：
[1]戴敏;亢泽峰;胡竹林;李妍-.压力诱导兔视网膜干细胞向视网膜神经节细胞分化研究)[J].中华实验眼科杂志,2022(12):1134-1140
A类：
RSCs,Brn3b
B类：
视网膜神经节细胞,细胞分化,RGCs,SPF,上皮组织,原代,级新生,新西兰大白兔,视网膜神经上皮,皮层,巢蛋白,Nestin,免疫荧光染色法,脱氧核苷,尿嘧啶,BrdU,流式细胞术,细胞免疫,免疫荧光检测,分析鉴定,体外培养,Thy1,抗体鉴定,Transwell,共培养体系,blot,mmHg,kPa,表达变化,阳性细胞,抗体表达,表达阳性,GS,双色,染色结果,白相,相对表达量,压力能,分化成,青光眼
AB值：
0.172319
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