目的:探讨褪黑素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的人晶状体上皮细胞(HLECs)焦亡的影响及其机制。 方法:取传代培养的HLECs分为5个组，其中正常对照组常规培养，模型对照组于100 μmol/L H 2O 2条件下培养，褪黑素组、维生素E组和维生素E溶剂组分别用1×10 -6 mol/L褪黑素、100 μmol/L维生素E和维生素E溶剂预处理后，用100 μmol/L H 2O 2继续培养，收集细胞待检测。为进一步探讨褪黑素的作用机制，将细胞分为7个组，其中正常对照组常规培养；模型对照组细胞于100 μmol/L H 2O 2条件下培养；核转录因子E2相关因子2短发夹RNA(shNrf2)阴性对照组和shNrf2组细胞分别用shNrf2阴性对照和shNrf2慢病毒转染，并于终浓度100 μmol/L H 2O 2条件下培养；褪黑素组细胞在终浓度1×10 -6 mol/L褪黑素条件下培养，然后加入终浓度100 μmol/L H 2O 2继续培养；褪黑素+shNrf2阴性对照组和褪黑素+shNrf2组细胞首先分别采用shNrf2阴性对照或shNrf2慢病毒转染，再于终浓度1×10 -6 mol/L褪黑素和终浓度100 μmol/L H 2O 2条件下培养，收集各组细胞。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性，白细胞介素(IL)-1β和IL-18浓度；采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧簇(ROS)的荧光强度；采用Western blot法检测各组细胞中Nrf2、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1 p20、GSDMD-N蛋白的表达。 结果:ELISA法检测发现，与模型对照组相比，褪黑素组和维生素E组细胞培养上清液中LDH活性及IL-1β和IL-18浓度均有不同程度的下调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。流式细胞仪检测发现，褪黑素组和维生素E组细胞中ROS荧光强度分别为13 040.67±1 550.66、12 593.67±1 677.06，显著低于模型对照组的18 310.33±1 248.01，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Western blot结果显示，褪黑素组和维生素E组Nrf2蛋白相对表达量分别为4.24±0.44、3.73±0.38、较模型对照组的2.28±0.34明显上升(均 P<0.05)，褪黑素组和维生素E组NLRP3、ASC、caspase-1 p20及GSDMD-N蛋白相对表达量较模型对照组显著下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。shNrf2组相较于shNrf2阴性对照组，褪黑素+shNrf2组相较于褪黑素+shNrf2阴性对照组，细胞培养上清液中LDH活性、IL-1β和IL-18浓度均显著上升，细胞中Nrf2蛋白相对表达量明显下降，细胞中ROS荧光强度、NLRP3、ASC、caspase-1 p20及GSDMD-N焦亡相关蛋白相对表达量明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:褪黑素可能通过激活Nrf2，减少NLRP3炎性体的释放，进而抑制HLECs焦亡。

人晶状体上皮细胞;褪黑素;氧化损伤;细胞焦亡;Nrf2;NLRP3炎性小体

杨鑫;刘旭辉;孟佳;方梦园;张凤妍

郑州大学第一附属医院眼科，郑州　450052

中华实验眼科杂志

[1]杨鑫;刘旭辉;孟佳;方梦园;张凤妍-.褪黑素抗人晶状体上皮细胞焦亡作用及其机制)[J].中华实验眼科杂志,2022(05):414-421

shNrf2,+shNrf2

褪黑素,人晶状体上皮细胞,细胞焦亡,H ,2O ,HLECs,传代培养,中正,正常对照,规培,10 ,核转录因子,E2,相关因子,短发,发夹,慢病毒转染,再于,酶联免疫吸附测定,细胞培养,养上,上清液,乳酸脱氢酶,LDH,流式细胞术,活性氧簇,ROS,荧光强度,blot,NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白,ASC,caspase,p20,GSDMD,流式细胞仪,白相,相对表达量,炎性体,氧化损伤,炎性小体

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