目的:对1型糖尿病（T1DM）患者含NLR家族CARD域蛋白4（NLRC4）基因外显子及外显子内含子交界区的罕见变异进行鉴定，并探讨其对基因功能的影响。方法:选取2017年8月到2020年9月中南大学湘雅二医院代谢内分泌科508例T1DM患者作为病例组，男264例，女244例，年龄［ M（ Q1， Q3）］为27（11，43）岁。同时选取同期体检科527名健康对照者，男290名，女237名，年龄［ M（ Q1， Q3）］为47（36，60）岁。对T1DM患者和健康对照者的NLRC4基因的外显子区域进行捕获测序，并进行一代测序验证。构建NLRC4基因野生型和突变型质粒，转染293T细胞，采用免疫印迹试验（WB）检测NLRC4蛋白表达量以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶前体（procaspase-1）切割产物含量。在转染野生型或突变型NLRC4质粒的293T细胞中加入放线菌酮（CHX），检测NLRC4蛋白降解情况。使用免疫荧光检测NLRC4蛋白质的定位。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清白细胞介素（IL）-1β浓度。 结果:测序结果显示，4例患者及2名健康对照者NLRC4基因的3号外显子存在杂合变异c.208C>T；2例患者4号外显子存在杂合变异c.1564T>C，1例患者4号外显子存在c.1219G>C；这3种变异可能为T1DM的致病性变异。NLRC4野生型和c.208>T、c.1564T>C、c.1219G>C突变型质粒转染的293T细胞中，NLRC4蛋白表达水平、降解速率、定位以及procaspase-1的切割产物含量无明显改变；但转染c.1219G>C、c.208C>T突变型质粒的293T细胞分泌的IL-1β浓度［ M（ Q1， Q3）］分别为15.25（12.98，17.52）、15.44（13.81，17.07）ng/L，均低于野生型质粒的18.70（16.59，20.81）ng/L（ P=0.020、0.010）。 结论:NLRC4基因外显子罕见变异c.208C>T、c.1564T>C和c.1219G>C可能不改变蛋白质的表达水平、蛋白质的降解及定位，但c.208C>T和c.1219G>C错义突变可能抑制了炎症因子IL-1β的产生，从而对基因功能产生影响。

糖尿病，1型;炎症小体;外显子测序;功能学分析

许林凌;罗海荣;时夏捷;庞海鹏;李嘉琪;王祎梦;罗说明;林健;俞海波;肖扬;李霞;黄干;谢志国;周智广

国家代谢性疾病临床医学研究中心　糖尿病免疫学教育部重点实验室　中南大学湘雅二医院代谢内分泌科，长沙　410011

中华医学杂志

[1]许林凌;罗海荣;时夏捷;庞海鹏;李嘉琪;王祎梦;罗说明;林健;俞海波;肖扬;李霞;黄干;谢志国;周智广-.1型糖尿病患者NLRC4基因外显子罕见变异的鉴定及其对基因功能的影响)[J].中华医学杂志,2022(16):1216-1223

procaspase,208C,1564T,1219G

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