目的 探讨微小RNA-455-3p(miR-455-3p)对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖、凋亡及炎症因子分泌功能的影响及可能机制.方法 建立卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘大鼠模型(模型组),同时设立正常对照组(正常大鼠,等量生理盐水),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组大鼠肺组织miR-455-3p表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织和血清中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平.分离大鼠ASMC,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-455-3p与Toll样受体4(TLR4)的靶向关系;使用TNF-α刺激哮喘大鼠ASMC产生炎症反应.通过Lip2000转染法转染 miR-455-3p NC(miR-455-3p NC 组)、miR-455-3p mimic(miR-455-3p mimic 组)和共转染 miR-455-3p mimic 与 pcDNA(miR-455-3p mimic+pcDNA 组)、miR-455-3p mimic 与 pcDNA-TLR4(miR-455-3p mimic+pcDNA-TLR4 组)于哮喘大 鼠炎症ASMC,另设正常对照组(正常大鼠ASMC)和模型组(哮喘大鼠炎症ASMC),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,采用ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6水平,采用qRT-PCR和免疫印迹法(WB)分别检测miR-455-3p、TLR4 mRNA及TLR4蛋白表达水平.结果 模型组大鼠肺组织中miR-455-3p表达水平低于正常对照组,且肺组织与血清中TNF-α、IL-6表达水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-455-3p可直接靶向抑制TLR4基因表达.与正常对照组相比,模型组大鼠ASMC中miR-455-3p表达水平、ASMC增殖活性降低,TLR4 mRNA及TLR4蛋白表达水平、凋亡率和ASMC上清液TNF-α、IL-6水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与 miR-455-3p NC 组相比,miR-455-3p mimic 组 ASMC 中 miR-455-3p 表达水平、ASMC 增殖活性升高,TLR4 mRNA及TLR4蛋白表达水平、凋亡率和ASMC上清液TNF-α、IL-6水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与miR-455-3p mimic+pcDNA 组比较,miR-455-3p mimic+pcDNA-TLR4 组 ASMC 中 miR-455-3p 表达水平、ASMC 增殖活性降低,TLR4 mRNA 及 TLR4蛋白表达水平、凋亡率和ASMC上清液TNF-α、IL-6水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-455-3p可通过靶向抑制TLR4表达,减轻哮喘大鼠ASMC炎症反应,调节其增殖与凋亡平衡.

哮喘;大鼠;气道平滑肌细胞;微小RNA-455-3p;Toll样受体4;增殖;凋亡;炎症

薛梅;廖怡;卢薇

四川省成都市中四医结合医院 儿科,四川 成都,610000

实用临床医药杂志

[1]薛梅;廖怡;卢薇-.微小RNA-455-3p调控Toll样受体4对哮喘大鼠气道平滑肌细胞的影响)[J].实用临床医药杂志,2022(22):25-32

Lip2000

3p,Toll,样受体,哮喘,气道平滑肌细胞,miR,ASMC,分泌功能,可能机制,卵清蛋白,OVA,大鼠模型,正常对照,等量,生理盐水,实时荧光定量聚合酶链反应,qRT,肺组织,酶联免疫吸附试验,炎性因子,双荧光素酶报告基因实验,TLR4,NC,共转染,mimic+pcDNA,偶氮,氮唑,MTT,末端标记,标记法,TUNEL,上清液,免疫印迹法,WB,蛋白表达水平,低于正常,靶向抑制,增殖活性,凋亡率,平降

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