目的 探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制.方法 以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用LipofectamineTM2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1 组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染 pcDNA3.1)、ALKBH5-WT 组(转染 pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT 组(转染 pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组.采用比色法检测细胞中 N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC50);采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平.结果 与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P＜0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响.与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD450nm值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P＜0.05).在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响.结论 沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性.

N6-甲基腺苷;烷基化修复蛋白B同源物5;果蝇Zeste基因增强子人类同源物2;阿霉素;P糖蛋白;多药耐药基因1

陈莉;吉慧娟;任利彬;张洪峰;索晓慧;刘洪峰;夏利敏

河北省邯郸市中心医院 血液内一科,河北邯郸,056001;河北省邯郸市中心医院 普外科,河北邯郸,056001;河北省邯郸市中心医院 科研科,河北邯郸,056001;河北省邯郸市中心医院 乳腺外科,河北邯郸,056001

实用临床医药杂志

[1]陈莉;吉慧娟;任利彬;张洪峰;索晓慧;刘洪峰;夏利敏-.烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响)[J].实用临床医药杂志,2022(07):87-92,97

2+pcDNA3,H204A

烷基化,果蝇,Zeste,基因增强,增强子,类同,K562,阿霉素,细胞耐药,ALKBH5,ADM,白血病,细胞系,LipofectamineTM2000,si,NC,空载,转染,WT,MUT,EZH2,比色法,N6,腺苷,m6A,CCK,半数抑制浓度,IC50,荧光光度计,光度计法,外排,blot,糖蛋白,gp,多药耐药基因,MDR1,免疫共沉淀,甲基化,MeRIP,耐药性,蛋白表达水平,含量降低,过表达,野生型,而过,突变型,光密度值,OD450nm,平降,荧光强度,可上,细胞活力

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