目的 基于铁死亡信号通路探究槲皮素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制.方法 CCK-8法筛选槲皮素作用于A549细胞的实验浓度;平板克隆法检测槲皮素对A549细胞集落形成能力的影响;利用试剂盒检测槲皮素对A549细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平的影响;采用Westernblotting检测槲皮素对A549细胞铁死亡相关蛋白及线粒体凋亡蛋白表达的影响;采用流式细胞仪检测槲皮素对A549细胞内线粒体活性氧(mitochondrial reactive oxygen species,mtROS)、脂质过氧化物水平及细胞凋亡的影响.联合铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)或ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)检测槲皮素对A549细胞内GSH水平及铁死亡相关蛋白表达的影响.结果 与对照组比较,槲皮素显著抑制A549细胞存活率,且呈时间和剂量相关性(P＜0.01);槲皮素呈剂量相关性地抑制A549细胞集落形成(P＜0.01),显著降低A549细胞内GSH水平(P＜0.01),上调细胞内mtROS及脂质过氧化物水平(P＜0.05、0.01),诱导细胞凋亡(P＜0.01);显著促进铁死亡相关蛋白p53表达(P＜0.05、0.01),并抑制谷胱甘肽过氧化物酶4(recombinant glutathione peroxidase 4,GPX4)及胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)蛋白表达(P＜0.01);显著促进线粒体凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparateprotease-3,Caspase-3),Caspase-9、细胞色素 C(cytochrome C,CytC)和 B 淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)相关 X 蛋白(Bcl-2 associatedX protein,Bax)蛋白表达(P＜0.05、0.01),并抑制抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达(P＜0.01).与槲皮素组比较,槲皮素+NAC组与槲皮素+Ferrostatin-1组均不同程度恢复槲皮素引起的细胞存活率下降(P＜0.05、0.001),Ferrostatin-1可显著上调GPX4及SLC7A11蛋白表达水平(P＜0.05),并回调GSH水平(P＜0.05).结论 槲皮素能够抑制A549细胞增殖并诱导铁死亡,进而导致细胞凋亡,具有诱导A549细胞铁死亡的生物学效应.

非小细胞肺癌;槲皮素;铁死亡;细胞增殖;线粒体活性氧;脂质过氧化物

李畅;王浩;贺千羽;郭向宇;姜彤伟;郭焱

长春中医药大学临床医学院,吉林长春 130117;集安市医院,吉林集安 134200

中草药

[1]李畅;王浩;贺千羽;郭向宇;姜彤伟;郭焱-.槲皮素通过诱导铁死亡抑制A549细胞增殖的作用及机制研究)[J].中草药,2022(22):7112-7120

asparateprotease,associatedX,+Ferrostatin

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