目的 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制.方法 利用无糖无血清培养基结合厌氧(94％N2、5％CO2、1％O2)处理H9c2心肌细胞4h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24h,制备H/R损伤模型.在造模前12h给予圣草次苷(5、10、20μg·mL-1),细胞活力及乳酸脱氢酶(LDH)检测实验中选择灯盏乙素(20 μg·mL-1)作为阳性药,对照组及模型组给予等体积DMSO.MTT法测定细胞存活率;试剂盒检测细胞培养上清液中LDH水平;试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;TUNEL染色检测细胞凋亡;DCFH-DA和JC-1探针分别检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位改变;Western blotting检测核蛋白中转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)和总蛋白中血红素氧合酶1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶(GCL)水平.结果 与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞存活率明显下降,凋亡明显增加,LDH水平明显升高,细胞内MDA水平明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低,ROS释放明显增多,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,圣草次苷可剂量相关性地改善上述变化,其中10、20 11g-mL-1组均差异显著(P＜0.01).Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞Nrf2核转位以及HO-1、GCL表达水平无显著变化;与模型组比较,圣草次苷10、20μg·mL-1显著增加Nrf2核转位及HO-1、GCL表达水平(P＜0.01).结论 圣草次苷能够保护H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,增加细胞内源性抗氧化能力,抑制氧化应激损伤,保护线粒体功能以阻止细胞凋亡的发生.

圣草次苷;心肌缺血再灌注损伤;缺氧/复氧;氧化应激;Nrf2信号通路

陈荣昌;王梦晨;杨龙坡;孙晓波

中国医学科学院,北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193

药物评价研究

[1]陈荣昌;王梦晨;杨龙坡;孙晓波-.圣草次苷激活Nrf2信号通路保护H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究)[J].药物评价研究,2022(12):2443-2449

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