本研究旨在探讨香青兰有效部位(effective parts of Dracocephalum moldavica,EPDM)通过抑制程序性坏死通路对缺血再灌注损伤人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMECs)的保护作用和分子机制.泛半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK联合氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)损伤建立HBMECs程序性坏死模型,以模拟脑缺血再灌注损伤过程.细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力;Hoechst 33342/PI荧光双染检测细胞程序性坏死率;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量;采用2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯探针、钙黄绿素乙酰甲酯和JC-1探针分别检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜通透性转化孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)开放情况以及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β (interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)释放情况;免疫印迹法检测程序性坏死相关蛋白表达.结果 表明,与对照组比较,Z-VAD-FMK联合OGD/R可使HBMECs活力下降,程序性坏死率升高,LDH释放增加,ROS产生增多,MPTP开放,MMP降低,TNF-α,IL-1β以及IL-6分泌增加,受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein kinase 3,RIP3)和线粒体丝氨酸/苏氨酸磷酸酶5 (phosphoglycerate mutase 5,PGAM5)表达升高,磷酸化混合系结构域样蛋白(phospho-mixed lineage kinase domain-like protein,p-MLKL)/MLKL比值升高;而EPDM预保护可部分逆转这些因素的变化.上述结果表明,EPDM可能通过抑制RIP3/MLKL/PGAM5通路和MPTP开放以保护线粒体功能,进而使HBMECs免受脑缺血再灌注损伤,可为EPDM治疗脑缺血性相关疾病提供有价值的科学依据.

香青兰有效部位;脑缺血再灌注损伤;氧糖剥夺/复氧;程序性坏死;混合谱系激酶结构域样蛋白;线粒体膜通透性转换孔

杨志航;王雪萌;徐磊;苏文灵;卡德尔业·卡德尔;徐明;郑瑞芳;邢建国

石河子大学药学院,新疆石河子832000;新疆药物研究所,新疆乌鲁木齐830002;新疆维吾尔药重点实验室,新疆乌鲁木齐830002;中国药科大学,江苏南京210009

药学学报

[1]杨志航;王雪萌;徐磊;苏文灵;卡德尔业·卡德尔;徐明;郑瑞芳;邢建国-.香青兰有效部位对OGD/R损伤诱导的人脑微血管内皮细胞程序性坏死的作用机制研究)[J].药学学报,2022(02):409-418

香青兰有效部位

OGD,人脑微血管内皮细胞,细胞程序性坏死,effective,parts,Dracocephalum,moldavica,EPDM,制程,伤人,human,brain,microvascular,endothelial,cells,HBMECs,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,蛋白酶抑制剂,VAD,FMK,氧糖剥夺,复氧,glucose,deprivation,oxygenation,脑缺血再灌注损伤,细胞毒性,毒性检测,检测试剂盒,counting,kit,CCK,细胞活力,Hoechst,试剂盒法,乳酸脱氢酶,lactate,dehydrogenase,LDH,二氯,荧光素,乙酸酯,钙黄绿素,甲酯,JC,细胞内活性氧,reactive,species,ROS,mitochondrial,permeability,transition,pore,MPTP,放情,线粒体膜电位,membrane,potential,MMP,酶联免疫吸附实验,实验检测,tumor,necrosis,interleukin,免疫印迹法,检测程序,相互作用蛋白,receptor,interacting,protein,kinase,RIP3,丝氨酸,苏氨酸,phosphoglycerate,mutase,PGAM5,磷酸化,mixed,lineage,domain,like,MLKL,线粒体功能,免受,缺血性,相关疾病,混合谱系激酶结构域样蛋白,线粒体膜通透性转换孔

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