目的 探究氧化苦参碱诱导结肠癌HCT116细胞死亡的作用机制.方法 将结肠癌HCT116细胞随机分为对照组和氧化苦参碱(2、4、8、12、16、20、30、40mmo1·L-1)组,通过CCK-8法检测各浓度氧化苦参碱作用24、48h对结肠癌细胞存活率的影响;光学显微镜下观察氧化苦参碱(15、20、25 mmol·L-1)对HCT116细胞形态的影响;通过Hoechst染色法和Annexin V/PI双染流式细胞术法观察氧化苦参碱对HCT116细胞凋亡的影响;JC-1染色观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blotting法检测各组细胞成熟体半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL2关联X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)、消化道皮肤素E(GSDME)、细胞周期蛋白l(cyclin-D1)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、β-连环素(β-catenin)、生存素(survivin)的蛋白表达情况.结果 与对照组比较,氧化苦参碱可以明显降低HCT116细胞的存活率,且存在剂量及时间相关性,作用24、48h的半数抑制浓度(IC50)分别为18.80、10.75mmol·L-1;氧化苦参碱组形状正常的HCT116细胞明显减少,均出现部分类圆球形的细胞,并且折光率明显降低;经Hoechst染色后氧化苦参碱组HCT116细胞的蓝色荧光明显加深,且相对集中,流式细胞术结果显示细胞凋亡率显著增加(P＜0.05、0.01);JC-1染色结果表明氧化苦参碱可以降低HCT116细胞线粒体膜电位;氧化苦参碱组Bcl-2、β-catenin、c-Myc、cyclin D1和survivin蛋白表达水平显著下降(P＜0.05、0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Cyt-C、GSDME 蛋白表达水平及 Bax/Bcl-2 显著上升(P＜0.05、0.01).结论 氧化苦参碱可能通过下调Wntβ-catenin信号通路,促进线粒体依赖的细胞内源性凋亡和细胞焦亡发挥抗结肠癌作用.

氧化苦参碱;结肠癌;凋亡;焦亡;Wnt/β-catenin信号通路;线粒体膜电位

张景正;钟嫄;鲍真真;陈娴

江苏卫生健康职业学院,江苏南京 210031;江苏省老年病医院,江苏南京 210031

药物评价研究

[1]张景正;钟嫄;鲍真真;陈娴-.氧化苦参碱通过Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌HCT116细胞凋亡和焦亡作用研究)[J].药物评价研究,2022(10):2017-2023

40mmo1

氧化苦参碱,Wnt,catenin,HCT116,细胞死亡,CCK,48h,结肠癌细胞,细胞存活率,光学显微镜,显微镜下,细胞形态,Hoechst,染色法,Annexin,流式细胞术,JC,线粒体膜电位,blotting,细胞成熟,半胱氨酸蛋白酶,cleaved,Caspase,Bcl,BCL2,Bax,细胞色素,Cyt,GSDME,细胞周期蛋白,cyclin,D1,骨髓细胞,癌基因,Myc,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶,PARP,连环,生存素,survivin,时间相关性,半数抑制浓度,IC50,75mmol,圆球形,折光率,蓝色,光明,细胞凋亡率,染色结果,蛋白表达水平,进线,内源性,细胞焦亡,抗结肠癌

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