目的 基于网络药理学结合体内实验探讨当归补血汤对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠的干预作用及相关作用机制.方法 通过数据库收集当归补血汤中的活性成分及其治疗CIRI的靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;通过Auto Dock软件对关键作用靶点与主要活性成分进行分子对接验证.SD大鼠给予尼莫地平或当归补血汤2周后,采用改良Longa线栓法复制大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,对神经行为学进行评分,并测定脑组织梗死面积;采用TUNEL染色法测定脑组织细胞凋亡情况;采用苏木素-伊红(HE)染色法考察脑组织病理变化;采用ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和 IL-1β水平;采用 qRT-PCR 检测脑组织 TNF-α、IL-6和 IL-1βmRNA 表达;采用 Western blotting 检测脑组织蛋白激酶 B(protein kinase B,Akt)、磷酸化 Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和 Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达.结果 筛选出当归补血汤30种活性成分,得到当归补血汤治疗CIRI的靶点467个,核心靶点55个.KEGG通路富集分析表明磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/Akt信号通路是当归补血汤抗CIRI的关键机制之一.分子对接显示,当归补血汤中主要活性成分与核心作用靶点中的Akt1、信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、转录因子 AP-1(transcription factor AP-1,JUN)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)、TNF和IL-6等具有较为稳定的结合活性.动物实验结果表明,当归补血汤能够改善CIRI大鼠神经功能损伤(P＜0.05);减少脑组织梗死面积(P＜0.05、0.01);减轻脑组织病理损伤;降低脑组织细胞凋亡指数(P＜0.05、0.01、0.001);降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P＜0.05、0.01);降低脑组织中TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达(P＜0.01、0.001);增加脑组织中Akt的磷酸化水平(P＜0.01、0.001)而激活PI3K/Akt信号通路,进一步上调Bcl-2蛋白表达(P＜0.05、0.01、0.001),下调Bax蛋白表达(P＜0.05、0.001).结论 当归补血汤可能通过作用多靶点及多通路治疗CIRI,其机制与影响Akt1、TNF、IL-6、IL-1β等蛋白的表达进而调控PI3K/Akt信号通路抑制炎症和细胞凋亡有关.

当归补血汤;脑缺血再灌注损伤;网络药理学;磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路;炎症;细胞凋亡;毛蕊异黄酮葡萄糖苷;毛蕊异黄酮;阿魏酸;芒柄花素;藁本内酯;黄芪甲苷

贵州中医药大学,贵州贵阳 550025;贵州中医药大学药学院,国家苗药工程技术研究中心,贵州中药炮制与制剂工程技术研究中心,贵州贵阳 550025;贵州医科大学,贵州贵阳 550025

[1]石娅;刘文;刘兴德;宋信莉;李鑫;舒万芬;张甘纯;秦琴;王洪鑫-.基于PI3K/Akt信号通路探究当归补血汤干预大鼠实验性脑缺血再灌注损伤的作用机制)[J].中草药,2022(16):5052-5065

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