该研究通过构建EA.hy926细胞心肌缺血模型,对比2个开心散类方(补心汤和定志小丸)3个剂量组(500、200、100μg·mL-1)对EA.hy926细胞活力的影响.而后基于TCMSP、TCMID、SYMMAP、STRING等公共数据库和KEGG通路分析等网络药理学基本方法,初步寻找开心散优效类方补心汤发挥心脏保护作用的分子机制.在异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导的大鼠心肌缺血模型上,进行补心汤药效学再评价,并采用蛋白印迹(Western blot,WB)法测定磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路相关蛋白的表达.体外模型筛选研究发现,开心散不同配伍的2个类方中,补心汤显著提高缺血后EA.hy926细胞的活力,且效果优于定志小丸.网络药理学分析预测该方可能通过PI3K/AKT信号通路发挥心脏保护作用.动物实验验证研究中确证,补心汤治疗后模型大鼠心脏超声射血分数(ejection fraction,EF)和短轴收缩率(fractional shortening,FS)明显升高,左心室舒张前壁厚度(diastolic left ventricular anterior wall,LVAWd)、左心室收缩前壁厚度(systolic left ventricular anterior wall,LVAWs)和左心室舒张后壁厚度(diastolic left ventricular postenor wall,LVPWd)明显变大,心率(beat per minute,BPM)和左心室舒张内径(diastolic left ventricular diameter,LVIDd)明显降低,心电图ST段得到明显改善;Masson染色显示补心汤恢复心肌厚度,减少胶原纤维,增加肌纤维,减少梗死面积,改善心肌缺血;同时补心汤抑制心肌缺血诱导的血清炎症因子[tumor necrosis factor-α(TNF-α)和interleukin-6(IL-6)]和心肌酶[creatine kinase(CK)和 lactate dehydrogenase(LDH)],增加大鼠心肌细胞 p-AKT/AKT 的比例,增加相关下游通路 PI3K、NF-κB、IKK-α、Bcl-xl蛋白的表达,降低凋亡蛋白Bax蛋白表达.综上,补心汤显示出良好的心脏保护作用,其机制可能与PI3K/AKT信号通路关键靶蛋白相关.

开心散类方;补心汤;心脏保护;心肌缺血;PI3K/AKT信号通路

李夏;王元博;王超臣;李欣;胡园

解放军总医院研究生院,北京100089;解放军总医院医疗保障中心药剂科,北京100089

中国中药杂志

[1]李夏;王元博;王超臣;李欣;胡园-.基于网络药理学和实验验证探究养心开窍开心散类方补心汤调控PI3K/AKT信号通路保护心脏的机制)[J].中国中药杂志,2022(21):5916-5925

开心散类方,SYMMAP,postenor

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