[目的]研究miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞增殖分化的影响及其在不同组织中的表达情况,为探究miRNA在肌肉发育中的调控机制提供理论基础.[方法]利用生物信息学方法预测miR-495-3p的靶基因;实时荧光定量PCR检测miR-495-3p及其靶基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌等组织中的表达水平.构建 miR-495-3p 的过表达(miR-495-3p mimic、miR-495-3p mimic NC)及抑制物(miR-495-3p inhibitor、miR-495-3p inhibitor NC),在山羊骨骼肌细胞汇合度达60％～70％时进行转染,并用含2％马血清的培养基进行诱导分化,用CCK-8检测细胞增殖活力,实时荧光定量PCR检测过表达和干扰效率及增殖分化相关基因配对盒基因(paired-box 7,Pax7)、细胞蛋白周期 E(Cyclin E)、肌细胞生成素(myogenin,myoG)、生肌因子5(recombinant myogenic factor 5,Myf5)的表达;构建miR-495-3p靶基因的野生型和突变型载体并转染至293T细胞,用双荧光素酶测定miR-495-3p与其靶基因的结合情况.[结果]生物信息学预测结果表明,miR-495-3p的靶基因为心肌肌动蛋白α1(alpha cardiacactin 1,ACTC1),且miR-495-3p和ACTC1在1和10月龄山羊背最长肌中表达量均差异极显著(P＜0.01).miR-495-3p和ACTC1在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌6种组织中均有表达,在背最长肌中表达量较高.细胞转染结果表明,miR-495-3p mimic极显著促进miR-495-3p的表达(P＜0.01),miR-495-3p inhibitor 极显著抑制 miR-495-3p 的表达(P＜0.01),说明 miR-495-3p mimic 和 miR-495-3p inhibitor 可用于后续试验.实时荧光定量PCR结果表明,过表达miR-495-3p促进骨骼肌细胞分化相关标志基因MyoG、Myf5的表达,抑制miR-495-3p则降低MyoG、Myf5基因的表达;过表达、干扰miR-495-3p对Pax7、Cyclin E基因的表达及细胞增殖活力均无显著影响(P＞0.05).双荧光素酶报告结果表明,miR-495-3p与ACTC1基因存在靶向关系.[结论]miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞的增殖无显著影响,但可通过靶向ACTC1基因促进山羊骨骼肌细胞分化.

山羊;miR-495-3p;骨骼肌细胞;分化

杨丽丽;张琼文;张瑜;刘笑笑;陈婷;江明生

广西大学动物科学技术学院,南宁530004

中国畜牧兽医

[1]杨丽丽;张琼文;张瑜;刘笑笑;陈婷;江明生-.miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞增殖分化的影响)[J].中国畜牧兽医,2022(04):1271-1279

myoG,cardiacactin

3p,山羊,羊骨,骨骼肌细胞,细胞增殖分化,不同组织,miRNA,肌肉发育,调控机制,利用生物,生物信息学方法,靶基因,脾脏,肺脏,背最长肌,腿肌,过表达,mimic,NC,抑制物,inhibitor,汇合,诱导分化,CCK,细胞增殖活力,paired,box,Pax7,Cyclin,生成素,myogenin,肌因子,recombinant,myogenic,Myf5,野生型,突变型,293T,双荧光素酶,肌动蛋白,alpha,ACTC1,月龄,均差,细胞转染,细胞分化,标志基因,MyoG,细胞的增殖,进山

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